昆山吉和力仪器有限公司（以下简称“吉和力”）是一家提供专业服务和仪器设备的集成供应商，公司以用户实际需求为导向，提供最合适、性价比最高的仪器，致力于打造一站式服务平台。为了让业内人士对qPCR进行更加深入的了解，吉和力整理了一些相关常见问题，并对这些问题一一进行了解答。

qPCR的英文全称是Real-time Quantitative PCR Detecting System，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，简称qPCR。

简单来说，qPCR就是利用荧光信号的变化，实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。而常规的PCR无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时监测。

如何提高RT-PCR反应的灵敏度与特异性？

①确定模板RNA完整性，无DNA污染；

②RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂；

③为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin；

④使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱；

⑤若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果；

⑥设计引物时，避免在引物3端含有互补序列，避免形成内部发卡结构。

避免RNA降解的方法有哪些？

①在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA；

②运用良好无污染技术分离RNA；

③将组织从动物体取出后立刻提取RNA，并将提取好的RNA反转录为cDNA进行低温保存。

RNA中含有逆转录抑制剂时，怎么处理？

逆转录抑制剂包括：SDS、EDTA、甘油、焦磷酸钠、亚精胺和胍盐，可将对照RNA与样品混合，同对照RNA反应比较产量以检测RNA抑制剂；……