刁连娜

液相色谱-质谱联用法测定人血浆氯吡格雷的浓度及其药动学研究

刁连娜

目的 采用液相色谱-质谱联用法对健康受试者体内的人血浆氯吡格雷含量进行分析，并对氯吡格雷在人体内的药动学进行研究。方法 选取鞍山市长大医院2015年6月至2016年6月收治的26例健康受试者为研究对象，对其进行氯吡格雷药物口服，并在口服后对患者的肘静脉血进行药动学分析，主要采用液相色谱-质谱联用法进行检验，对受试者血浆中的氯吡格雷含量及其衍生物含量进行分析，总结氯吡格雷在患者体内的药动学结果。结果 相同添加值情况下，氯吡格雷与活性巯基代谢物的日间、日内精密度检测结果差异无统计学意义（P＞0.05），而两组受试者药动力学指标检测结果差异也无统计学意义（P＞0.05）。结论 通过液相色谱-质谱联用法测定人体内血浆中的氯吡格雷含量及其代谢产物含量的药动学结果准确、操作简单，能够有效指导临床检验。

氯吡格雷；液相色谱-质谱联用法；药动学分析

【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2017.04.007

氯吡格雷是临床常用药物，主要通过口服用药进行治疗。患者在口服用药后，经过代谢和反应生成氯吡格雷羧酸。此外，氯吡格雷还能够在人体内形成经细胞色素P450酶系代谢成活性巯基代谢物，该成分能够与人体内血小板膜受体结合，抑制血小板聚集，由于氯吡格雷羧酸与血小板膜受体的结合是不可逆的，因此氯吡格雷经常被应用于溶栓、抗栓疾病的治疗中[1-2]。但氯吡格雷在治疗脑梗死、脑中风等疾病过程中，易出现不良反应，对患者康复产生影响。为了分析氯吡格雷在抗栓、溶栓治疗中的应用优势，临床对于氯吡格雷应用的毒性与风险进行了分析，对患者血液中的活性巯基代谢物含量、浓度、药动学等指标进行分析，但由于活性巯基代谢物属于十分活泼的巯基，在临床检验和分析过程中经常无法准确检验，且需要在血液采集过程中加入活性巯基代谢物保护剂，操作十分繁琐，对检验十分不利[3-4]。为此，临床采用液相色谱-质谱联用法对人血浆中氯吡格雷的浓度进行分析，取得了一定的应用效果，本研究对所选26例健康受试者的临床检验资料进行总结，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年6月至2016年6月于我院行健康体检的26例健康受试者为研究对象，其中男14例，女12例，年龄30～42岁，平均（35± 3）岁，体重55～70 kg，平均（62±8）kg。所有健康受试者均在本研究前了解该试验过程、方法等内容，并自愿在知情同意书上签字，试验期间受试者并未进行剧烈运动，严格限制受试者吸烟、饮酒或酒精类饮料。

1.2 方法

1.2.1 药物与器械 仪器选用Agilent 1200液相色谱-串联质谱联用仪，主要包括高压泵、进样器、柱温箱、电喷雾离子化接口以及设计软件。药物则选择硫酸氢氯吡格雷片，分别由南京正大天晴制药有限公司和赛诺菲安万特制药有限公司生产，规格均为每片75 mg。按照仪器与试剂说明书严格进行操作。色谱柱：WATERS ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm× 50 mm，1.8 μm），流动相：水和乙腈，两种溶液均含有 0.1%甲酸。仪器设置中将柱温设置为 30 ℃，将10 μl样本放置于仪器中进行测定，时间为1.5 min，0～0.7 min时流动相B含量由20%逐渐上升为90%，并在0.7～1.2 min时保持90%的浓度，1.2～1.3 min时流动相B含量由90%逐渐下降为20%，并在1.3～1.5 min内保持在20%浓度。

1.2.2 试验方法 首先将26例受试者分别分为试验组与参照组，试验组患者采用赛诺菲安万特制药有限公司生产的硫酸氢氯吡格雷片，参照组患者采用南京正大天晴制药有限公司生产的硫酸氢氯吡格雷片，患者均在禁食、禁水12 h后清晨空腹用药，方式为口服，用250 ml温水送服75 mg硫酸氢氯吡格雷片，在服药后4 h两组患者统一发放早餐。待患者用药后15 min至48 h内分别进行不同时间的肘静脉血采集，时间分别为15 min、30 min、45 min、60 min、1.0 h、1.5 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h、8.0 h、12.0 h、24.0 h、36.0 h以及48.0 h，将不同时点采集的标本进行离心处理，离心机设置为每分钟4000 r，离心5 min，离心半径为26 cm，取上层清液放置于-20 ℃冰箱中待检。

1.2.3 标本检验方法 对离心后的血液样本进行取样，剂量为50 μl/样，向样本中加入50 mmol/L三（2-羧乙基）膦盐酸盐（TCEP），剂量为25 μl，利用涡旋处理5 min，然后加入乙腈溶液，乙腈溶液中含有氯甲酸苄酯（CBZ），乙腈溶液剂量为200 μl，CBZ含量为100 ng/ml，再进行涡旋处理，时间为2 min，然后进行离心处理，时间为5 min。将处理后的标本取上层清液，在避光条件下进行测定和操作。

1.3 观察指标 将控制检验的添加值和测定值均设定为4.00，平行检测3次，分析不同时点患者体内氯吡格雷及活性巯基代谢物的标准差、相对偏差、日内精密度、日间精密度差异，日间精密度是对所选2日间的血检结果进行取值，日内精密度则是对2日内不同时点血液检测结果进行取值，同时对氯吡格雷及其衍生物的药动学指标进行分析和比较。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析处理，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 氯吡格雷及其衍生物测定精准度比较 相同添加值情况下，氯吡格雷与活性巯基代谢物的日间、日内精密度检测结果差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 氯吡格雷及活性巯基代谢物平行测定3次的精准度比较(±s)

表1 氯吡格雷及活性巯基代谢物平行测定3次的精准度比较(±s)

组别 例数标准差(ng/ml)相对偏差(%)日内精密度(%)日间精密度(%) 0.001 0.00 5.24 6.15 0.004 -0.58 8.95 4.27氯吡格雷 26 0.005 -2.03 2.57 8.15 0.061 -0.76 8.51 10.48活性巯基代谢物 26 0.082 2.78 8.54 9.11 0.089 -0.87 7.49 8.06

2.2 药动力学比较 两组受试者药动力学指标检测结果显示差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 两组受试者药动力学比较(±s)

表2 两组受试者药动力学比较(±s)

组别 例数Cmax (ng/mL) Tmax (h) t1/2 (h) AUC0-48(hng/mL) AUC0-∞(hng/mL)参照组 13 1.81±1.09 1.02±0.87 3.58±1.25 4.48±4.67 4.51±4.71试验组 13 1.92±1.35 0.84±0.52 3.47±1.62 4.45±4.33 4.76±4.44

3 讨论

氯吡格雷在我国临床上主要应用于脑梗死、脑中风的治疗中，能够有效降低血液中血小板凝结效果，达到溶栓、抗栓等目的。患者在服用氯吡格雷后，其血液中产生一定的活性巯基代谢物，该代谢物是与血小板相结合的主要成分，活性巯基代谢物是氯吡格雷治疗脑梗死、脑中风的主要作用物质，是保证患者临床疗效的主要成分[5-6]。随着氯吡格雷在临床上应用逐渐增加，患者在用药过程中经常出现的不良发应也越来越明显，对氯吡格雷的临床应用产生了一定影响，因此，对氯吡格雷进行药物检验和药动力学研究十分必要。但在检验过程中，对氯吡格雷在人体内产生的衍生物检验有一定难度，因患者在服用氯吡格雷后，其体内所产生的活性巯基代谢物含量相对较低，且在血液中活性强，容易与血液中血小板发生反应，形成二硫键后无法得到有效检出，因此对临床检验有一定影响[7-8]。液相色谱-质谱联用法在氯吡格雷及其衍生物的测定中应用价值极高，既解决了氯吡格雷及其衍生物的检测问题，还能够对活性巯基代谢物在人体血液中的稳定性与药代动力学指标进行系统观察。而且通过不同时点的检验，对氯吡格雷的检验结果更加精确，能够有效指导氯吡格雷的临床药物检验工作。

本研究结果显示，通过液相色谱-质谱联用法检测人血浆中氯吡格雷浓度和药动力学指标，相同添加值情况下，氯吡格雷与活性巯基代谢物的日间、日内精密度检测结果差异无统计学意义，而两组受试者药动力学指标检测结果差异也无统计学意义，说明该方法检验结果相对稳定，可以有效测定人血浆中氯吡格雷浓度和代谢物浓度的变化，还能避免在血浆样本采集和处理过程中活性巯基代谢物含量减少的问题。此外，通过对两组药动力学比较分析也可得知，通过液相色谱-质谱联用法检测人血浆中氯吡格雷浓度和药动力学指标，检验结果能够随人体药物种类的差异得出不同结果，检验结果更加准确。

综上所述，通过液相色谱-质谱联用法检测人血浆中氯吡格雷浓度和药动力学指标，不但能直接检验，且检验结果十分精准。

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