朱国良，石麒麟

乳腺癌HER-2免疫组化柠檬酸高温高压抗原修复手工操作的最佳条件

朱国良，石麒麟

抗原修复；有效修复时间；手工操作；柠檬酸；免疫组织化学

免疫组化技术是临床病理诊断中重要的辅助技术之一，对于判断肿瘤的来源、分类、预后和鉴别诊断以及指导和评估临床治疗起着重要作用，而正确的抗原修复是免疫组化结果准确性的关键步骤。对常规10%中性福尔马林固定的石蜡切片进行抗原热修复是广泛接受的抗原修复方式。全自动多功能组织病理检测系统具有染色着色均匀、定位准确、可重复性强等优点[1]，但设备昂贵，试剂成本高，使用范围受到限制，基层医院病理科目前仍普遍使用手工操作方法。目前手工操作中各科的修复方法不尽相同[2]，即使相同的方法修复细节也有很大的差别。现以本科室HER-2检测为例，对大家普遍使用的柠檬酸高温高压抗原修复方法[3]的细节进行对比，观察不同修复条件下的结果差别，探讨柠檬酸高温高压抗原修复的最佳条件，确立大家能广泛接受的相对统一的手工抗原热修复方法。

1 材料与方法

1.1 标本 选取2014年1月～2015年6月湖州市第一人民医院病理科存档的经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋的78例乳腺癌组织，均行HER-2免疫组化检测，每例标本均连续3 μm厚切片，各切9张，分为9组，其中第9组加入已知染色结果为3+、2+、1+、0乳腺癌组织切片作为对照，65 ℃烤箱烤片2 h。

1.2 试剂 一抗HER-2(SP3即用型)、二抗免疫组化试剂盒(MaxVision2)、柠檬酸盐抗原修复液(粉剂，规格：2 000 mL每包，稀释后相当于pH 6.0工作液)、DAB显色剂、PBS(0.1 mol/L，pH 7.2～7.4)，均购自福州迈新公司；一抗HER-2(4B5即用型)和XT ultraView检测试剂盒购自罗氏公司。

1.3 仪器 市售家用压力锅(苏泊尔牌，不锈钢，内径18 cm)工作压力均为90 kPa；不锈钢切片架；美的家用电磁炉；全自动多功能组织病理检测系统(美国Ventana公司)。

1.4 方法 将组织切片脱蜡至水后，放入0.3%H2O2处理15 min，再入蒸馏水备用。具体修复方法见表1。修复完成后，后续步骤按照MaxVision2试剂盒操作说明书执行。对照第9组进行Ventana机器染色，按设备使用说明操作。免疫组化结果判断参照《乳腺癌HER-2检测指南(2014版)》[4]。

2 结果

第9组对照组织检测结果与原判读结果一致。第1组阳性率降低，且有12例不同程度掉片；第2组与第9组相比，判读结果最为接近，其中1例3+判读为2+，1例2+判读为1+，其余病例全部吻合，且组织无掉片，定位准确，背景清晰；第3组阳性强度略下降，部分组织出现非特异性着色；第4～6组阳性强度明显下降，出现大量假阴性；第7组出现假阳性，且有8例出现背景着色；第8组阳性率及阳性强度明显提高，出现假阳性，且普遍出现背景着色及个别组织掉片(表2)。

3 讨论

由于在组织固定过程中，甲醛与蛋白质发生交联形成醛交联蛋白，这种化合物封闭了抗原，导致抗体对抗原的特异性反应降低，从而导致假阴性，因此抗原修复对于免疫组化是不可或缺的，可直接影响染色结果。各实验室采用哪种抗原修复方法视具体情况而定，但不论采用哪种方法均应以准确的实验结果为最佳选择。热抗原修复虽然可提高敏感性，但操作不当亦可产生假阳性。高压锅法因成本低、操作简单易行、染色效果理想的优点而被大多数实验室使用，但也具有耗时和极易受温度影响的缺点。而抗原修复的关键因素主要是抗原修复液的选择和抗原修复的温度与时间，即不管何种修复方式跟有效修复时间[5]的长短关系密切。本实验结果表明柠檬酸高温高压抗原修复的方法因有效修复时间的不同，而产生完全不同的结果：第1组实验功率过高的电磁炉抗原修复易掉片及产生细胞核假阳性的风险，与文献报道一致[6]；第2组实验结果与第9组Ventana机器的结果最为吻合，第9组18例3+的病例第2组检测结果为17例3+、1例2+，第9组15例2+的病例第2组检测结果为14例2+，1例1+，其余病例检测结果一致，且第2组所有检测结果定位准确，结构清晰，不掉片；第3组实验因电磁炉功率过低则间接延长了修复时间，从而导致容易出现非特异性的背景着色；第4～6组实验由于有效修复时间不足，从而导致结果完全不同，相差甚远；第7、8组实验由于明显延长有效修复时间，从而导致阳性率升高，且出现假阳性，与文献报道一致[7]。本实验进一步证实了温度及有效修复时间的重要性。

表1 抗原修复不同手工操作方法比较

表2 Ventana机器染色和8组不同修复时间的手工染色结果比较

本组实验结果表明，第2组结果与Ventana机器的结果最为吻合，且定位准确，结构清晰，不掉片，是理想的HER-2柠檬酸高温高压抗原修复手工操作方法，适合基层医院使用。

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时间：2017-2-27 10:14

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浙江省湖州市第一人民医院病理科，湖州 313000

朱国良，男，主管技师。E-mail: blzgl@126.com

R 446

B

1001-7399(2017)02-0219-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.027

接受日期：2016-10-28