胡金凤，黄成文，刘君

(1.新疆农业大学林学与园艺学院，乌鲁木齐 830052；2. 新疆农业大学农学院，乌鲁木齐 830052)

西瓜食酸菌TA基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测

胡金凤1，黄成文2，刘君1

(1.新疆农业大学林学与园艺学院，乌鲁木齐 830052；2. 新疆农业大学农学院，乌鲁木齐 830052)

【目的】构建西瓜食酸菌TA基因的酵母双杂交诱饵载体，为探究TA基因编码产物参与西瓜食酸菌致病的机制奠定基础。【方法】通过PCR扩增TA基因，并定向克隆到载体pGBKT7，获得可用于酵母双杂交的诱饵载体pGBKT7-TA，经酶切鉴定和测序验证为正确后将pGBKT7-TA转化到酵母菌株AH109中；进一步用ADE2、HIS3、LacZ报告基因活性检测法检测pGBKT7-TA的自激活作用，用固体及液体营养缺陷型培养基培养法检测pGBKT7-TA的毒性作用。【结果】诱饵载体pGBKT7-TA对酵母菌株AH109没有自激活及毒性作用。【结论】所构建的诱饵载体可用于酵母双杂交系统的后续工作，为进一步从被西瓜食酸菌侵染的黄瓜子叶cDNA文库中筛选与TA互作的蛋白奠定了基础。

西瓜食酸菌；TA基因；酵母双杂交；诱饵载体

0 引 言

【研究意义】由西瓜食酸菌(Acidovoraxcitrulli，Ac)引起的细菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch，以下简称BFB)是一种可对葫芦科植物造成毁灭性危害的病害[1-3]，自从1987年在美国的一些商品西瓜地自然爆发以来[4,5]，该病害已在全球传播蔓延，并被发现也可导致甜瓜、籽瓜、南瓜、笋瓜以及黄瓜等其它葫芦科植物发病[6-12]，细菌性果斑病目前已经成为全球葫芦科作物产业的严重威胁[13]。迄今为止，世界范围内针对BFB病菌致病的生物学和分子生物学基础的认知非常有限，研究BFB病菌与寄主互作的分子机理，是开发有效控制BFB新途径、新方法的基础。……