白雪芹，杨瑞瑞，曾幼玲

(新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046)

不同引物对和退火温度对盐生植物盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响

白雪芹，杨瑞瑞，曾幼玲

(新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046)

【目的】以盐生植物盐穗木为材料，研究不同引物对和不同退火温度对盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响。【方法】设计扩增β-actin基因的两对引物，标记为β-actin1和β-actin2，分别建立这两对引物扩增盐穗木β-actin基因和特异性引物扩增该物种的过氧化物酶基因POD(盐响应的代表性基因)，在不同退火温度下的标准曲线和扩增曲线。【结果】不论55还是58℃退火温度，引物对β-actin1比引物对β-actin2有更好的扩增效率；在55℃退火温度下，引物对β-actin1有更高的扩增效率。在这两个退火温度下，分别以β-actin1和β-actin2引物对扩增β-actin基因作为内参，盐穗木POD基因的相对表达水平具有一定的差异性。【结论】引物和退火温度会影响荧光定量PCR的扩增效率，进而会影响靶基因的相对表达水平。

盐穗木；不同引物对；退火温度；β-actin；扩增效率

0 引 言

【研究意义】盐穗木 (Halostachyscaspica) 为藜科(Chenopodiaceae )多年生盐生植物。广泛生长于新疆极端盐碱环境中。为了适应高度的盐渍化，其植株叶片高度肉质化，是盐土荒漠主要植物之一[1]。目前主要研究了盐穗木耐盐的生理指标和盐相关基因的克隆及功能鉴定[2-5]。为准确反映受盐胁迫的盐穗木组织中各基因的表达模式，通过实时荧光定量PCR技术，利用常用的看家基因β-actin作为内参基因，以不同的引物对和退火温度探讨盐穗木β-actin扩增效率的影响，进而分析对靶基因相对表达水平的影响。……