梁锦辉 李莉 罗海林 黄河浪 黄梅 张翔 高山 毛谓东

存活素在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中表达及临床意义

梁锦辉1李莉1罗海林1黄河浪1黄梅1张翔1高山2毛谓东3

目的 探讨细胞凋亡抑制蛋白-存活素(Survivin)在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的表达及临床意义。方法采用免疫组化Envision二步法检测30例鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤，10例鼻腔鳞癌及10例正常下鼻甲黏膜标本中Survivin的表达。结果鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤和鼻腔鳞癌组织中survivin的表达分别为73.33%、80.00%，均显著高于正常下鼻甲黏膜组织的表达0%（P＜0.01）。结论Survivin在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤和鼻腔鳞癌的发生、发展中起重要作用，可能成为鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤和鼻腔鳞癌基因治疗的靶点。Survivin的高表达，预示SNIP的复发。

内翻性乳头状瘤；存活素；鼻腔；鼻窦；鳞状细胞癌

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（sinonasal inverted papilloma,SNIP）是常见的鼻腔鼻窦良性肿瘤，发病率约占鼻腔鼻窦肿瘤的0.5%～7%[1]，其病因及发病机制至今不明，容易复发，恶变是SNIP的突出特点。近年来，随着鼻内镜手术技术的提高，使得SNIP的治愈率得到了很大的提高，但其复发及恶变的原因仍未阐明。其恶变的发生率从5%～32%不等，一般认为6%～13%[2]，且多恶变为鳞状细胞癌。

存活素（survivin）是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族的一员。Survivin在肿瘤组织中广泛表达,在许多胚胎组织细胞亦有表达,然而在正常的人体组织中不表达或低表达[3]。近年来Survivin越来越受到人们的重视,许多研究表明Survivin是IAP家族中抗凋亡能力最强的蛋白质,与许多肿瘤的发生发展和预后相关，被认为是一些肿瘤的预后因素，并且能够作为癌症治疗的一个靶点[4]。但其与SNIP相关性的研究鲜见报道。本研究将探讨Survivin在SNIP、鼻腔鳞癌和下鼻甲黏膜组织中的表达，探讨其在SINP发生和发展中的作用，希望为SNIP预后及靶向治疗提供参数。

资料与方法

1 一般资料

选取汉中市中心医院2009～2014年有完整临床病理资料,病理检查证实为SNIP的标本30例，鼻腔鳞癌10例和正常下鼻甲黏膜组织10例作为对照。SNIP标本中男24例，女6例，年龄29～71岁,平均55.8岁。鼻腔鳞癌标本中男7例，女3例，年龄43～76岁,平均58.6岁。SNIP组又按是否复发分为初发组15例，复发组15例。

2 主要试剂及来源

兔抗人Survivin多克隆抗体从北京中杉金桥生物技术有限公司购买。ChemMateTM Envision试剂盒购自基因有限公司（上海）。

3 方法

标本经常规甲醛固定,石蜡包埋,常规切片,厚度约4μm。采用免疫组织化学Envision二步法,切片常规脱蜡后置蒸馏水玻璃缸，枸橼酸溶液中热修复抗原，经内源性过氧化物酶阻断剂孵育10min。实验组依次加入一抗（多抗survivin）孵育30min，一抗工作浓度为1∶100。磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。滴加Envision TM孵育30min，DAB显色后，复染、脱水、透明和封片，显微镜下观察结果。

4 结果判定

光镜下观察，Survivin在细胞质及细胞核着色，呈棕黄色。结果判定参照IRS(immunoractive score)半定量法。①染色强度记分:无着色记0分,淡黄色记1分,棕黄色记2分,棕褐色记3分；②阳性范围记分:在400倍视野下,每例随机选不重复5个视野,各计数100个细胞，计算出阳性细胞百分率，阳性细胞率＜5%记0分，5%～25%记1分，26%～50%记2分,51%～75%记3分,75%以上记4分。上述两项结果相乘:0分为阴性（-），1～2分为弱阳性（＋），3～6分为中等阳性（＋＋），＞6分为强阳性（＋＋＋）。

5 统计学处理

采用SPSS 13.0软件完成,计数资料采用χ2检验。不满足χ2检验条件的用Fisher确切概率法。以P＜0.05，差异有统计学意义。

结果

Survivin蛋白主要在肿瘤细胞的细胞质中着色（图1，2，3）,但也有部分细胞在细胞核内着色。颜色从浅黄色到深棕色,PBS缓冲液代替一抗的阴性对照不着色。SNIP组表达率73.33%(22/30)，鼻腔鳞癌组表达率80.00%（8/10),正常下鼻甲黏膜组织组未见表达（图4）。SNIP与正常下鼻甲黏膜中的表达的差异有统计学意义（P＜0.01），SNIP与鼻腔鳞癌中的表达差异无统计学意义（P＞0.05），鼻腔鳞癌与正常下鼻甲黏膜中的表达差异有统计学意义（χ2＝10.208, P＜0.01）（见表1）。Survivin蛋白的表达在SNIP复发组和初发组间差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

图1 Survivin表达于初发组SNIP的胞浆呈弱阳性。（Envision×400）

图2 Survivin表达于复发组SNIP的胞浆呈中度阳性。（Envision×400）

图3 Survivin表达于鳞癌组的胞浆呈强阳性。（Envision×400）

图4 Survivin在正常下鼻甲黏膜组织中无表达。（Envision×100）

表1 Survivin蛋白的表达情况

表2 Survivin蛋白鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中的表达

讨论

Survivin是1997年Ambrosini等利用效应细胞蛋白酶受体-1的cDNA在人类基因组文库中筛选分离出,定位于17q25，是IAP家族成员中分子质量最小的一个,具有抗凋亡和调节有丝分裂的双重功能[5]。细胞凋亡又称之为细胞程序性死亡,细胞凋亡与细胞增殖之间的动态平衡在维持机体稳态中起着非常重要的作用,二者失衡可能会导致肿瘤生成。Survivin的抗凋亡和促进细胞增殖功能，打破了细胞增殖与死亡的动态平衡，导致肿瘤形成和疾病发生。许多研究表明Survivin是IAP家族中抗凋亡能力最强的蛋白质[6]。

Survivin是在细胞循环G2/M期表达的一种分子量为16.5kDa的蛋白质，是IAPs成员之一。IAPs首次于杆状病毒中发现，它们可以抑制病毒感染所造成的宿主细胞死亡。Survivin具有杆状病毒IAP重复区序列（Baculoviral IAP repeat，BIR）,是一个锌结合的折叠区域，由四个小α环环绕着三股反向平行的β层形成[7]。这个特征性的结构是其抗凋亡作用中非常关键的结构。Survivin蛋白有助于有丝分裂及细胞分化的顺利完成。Survivin在正常组织中不表达或低表达，而在肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、晚期淋巴瘤、成神经纤维瘤和胃癌等肿瘤组织中广泛表达[8]。这一分布现象表明Survivin在正常的人体组织中的表达可能是静止的,在肿瘤组织中可能处于失控的表达状态[9]。当前Survivin抗凋亡的确切机制还不清楚。有些学者提出Survivin主要通过直接作用于细胞凋亡途径中的终末效应酶Caspase-3和Caspase-7而对细胞凋亡起调节作用,并且参与细胞周期调控以及肿瘤血管的生成[10]。深入研究Survivin这种特异性的凋亡抑制因子有助于我们了解肿瘤的发生与发展,而且可能为肿瘤的特异性诊断与靶向性治疗提供新的线索。

本研究通过免疫组织化学方法检测Survivin在30例SNIP，10例鼻腔鳞癌中的表达,其阳性表达率达到73.33%和80.00%，正常下鼻甲黏膜均未见表达，证实了Survivin在肿瘤组织中表达具有特异性。可以推测Survivin参与SNIP及鼻腔鳞癌的发生,且促进肿瘤的发展。有实验表明通过转染Survivin的反义核酸,可以导致内源性Survivin水平的下降,而且可以抑制细胞的生长和增加细胞的凋亡,再加上Survivin在肿瘤中的表达具有特异性,使其在靶向治疗中具有良好的应用前景[11]。Survivin在SNIP的复发组表达高于初发组，差异有统计学意义，复发组染色的强度高于初发组，提示Survivin在SNIP的侵袭性及破坏性生长中起重要作用，Survivin的表达和染色强度高，预示SNIP的复发，Survivin的表达可作为该肿瘤的预后的重要生物学指标。Survivin在鼻腔鳞癌组织中的表达率高于SNIP,但差异无显著性，这可能与本研究鼻腔鳞癌组织样本数较少有关。因此检测Survivin对于判断SNIP恶性变的意义，需进一步探讨。

综上所述，Survivin在SNIP及鼻腔鳞癌的发生、发展中起着重要的作用。Survivin在SNIP及鼻腔鳞癌组织中表达具有特异性。Survivin的表达和染色强度高，预示SNIP的复发。Survivin有望成为SNIP及鼻腔鳞癌基因治疗过程中的靶点，为将来临床基因治疗提供理论依据，从而降低SNIP的复发率及恶变率。

1 Choi JW,Kim SG,Kim YM,et a1.Clinical and histologic features of inverted papilloma-associated malignancy[J]. Eur Arch Otorhinolaryn-gol,2012,11:2349-2354．

2 But-Hadzic J,Jenko K,Poljak M,et a1.Sinonasal inverted papilloma associated with squamous cell carcinoma[J]. Radiol Oncol,2011,12:267-272．

3 Altieri DC.Targeting survivin in cancer[J].Cancer Lett, 2013,5:225-228．

4 Dallaqlio K,Petrachi T,Marconi A,et a1.Expression of nuclear survivin in normal skin and squamous cell carcinoma:a possible role in tumour invasion[J].Br JCancer, 2014,110:199-207．

5 Necochea-Campion Rd,Chen CS,Mirshahidi S,et a1. Clinico-pathologic relevance of Survivin splice variant expression in cancer[J].Cancer Lett,2013,10:167-174．

6 R del F,Sprenger T,Kaina B,et a1.Survivin as a prognostic/predictive marker and molecular target in cancer therapy[J].Curr Med Chem,2012,19:3679-3688．

7 Boidot R,Végran F,Lizard-Nacol S.Transcriptional regulation of the survivin gene[J].Mol Biol Rep,2014,41: 233-240.

8 Cheung CH,Huang CC,Tsai FY,et al.Survivin-biology and potential as a therapeutic target in oncology[J].Onco Targets Ther,2013,16:1453-1462．

9 Kanwar RK,Cheung CH,Chang JY,et a1.Recent advances in anti-survivin treatments for cancer[J].Curr Med Chem,2010,17:1509-1515．

10 Shin S,Sung BJ,Cho YS,et al.An anti-apoptotic protein human survivin is a direct in inhibitor of caspase-3 and caspase-7[J].Biochemistry,2001,40:1117～1123.

11 Ghadimi MP,Young ED,Belousov R,et a1.Survivin is a viable target for the treatment of malignant peripheral nerve sheath tumors[J].Clin Cancer Res,2012,18:2545 -2557．

（收稿：2015-10-16 修回：2016-04-25）

Expression and significance of Survivin in sinonasal inverted papilloma

LIANG Jinhui,LI Li,LUO Hailin,HUANG Helang,HUANG Mei,ZHANG Xiang,GAO Shan,MAO Weidong
Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery,Hanzhong Central Hospital,Hanzhong,723000,China

ObjectiveTo assess the protein expression of a new inhibitor of apoptosis,survivin,and it's clinical significance in sinonasal inverted papilloma(SNIP).MethodsImmunohistochemicalmethod was used to determine the expression of survivin in 30 cases of SNIP,10 cases of sinonasal squamous cell carcinoma(SCC)and 10 cases of normal inferior concha tissues.ResultsSurvivin was expressed in 22 of 30(73.33%)cases of SNIP,8 of 10(80.00%)cases of SCC and not expressed in 10(0%)cases of normal inferior concha tissues.Expression of survivin was significantly higher in SNIP and SCC than in normal tissues.ConclusionsSurvivin may play an important role in the pathway of progression of SNIP and SCC.Itmay be identified as a new therapeutic target.The high expression of Survivin indicates a recurrence of SNIP.

Inverted papilloma;Survivin;Nasal Cavity;Paranasal Sinuses;Squamous cell carcinoma

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.03.004

1 陕西省汉中市中心医院耳鼻咽喉头颈外科（723000）

2 陕西省汉中市中心医院肿瘤科

3 陕西省汉中市中心医院病理科

梁锦辉,主治医师.Email:6895210@qq.com