曾辉 王丽华 丁毅 姬毓娇 陈媛 郭裕

夏枯草开音合剂治疗慢喉喑药效学研究*

曾辉1王丽华1丁毅1姬毓娇1陈媛1郭裕1

目的 建立血瘀痰凝型大鼠慢喉喑模型，研究夏枯草开音合剂对大鼠慢喉喑的治疗效果。方法采用SPF级SD大鼠50只，随机分成空白对照组（A），模型对照组（B），中药低浓度组（C），中药中浓度组（D），中药高浓度组（E），血瘀痰凝型慢喉喑大鼠造模成功后，A、B组使用生理盐水，C-E组分别使用低、中、高浓度夏枯草开音合剂灌胃，灌胃30天后取声带标本观察病理改变，并进行统计分析。结果大鼠声带各项检验指标表明实验造模成功。灌胃30天后，夏枯草开音合剂对声带充血、水肿、炎细胞浸润、组织增生指标的疗效有统计学差异，并且在低中高3种药物浓度范围内，疗效随着药物浓度增高而提高。结论夏枯草开音合剂对血瘀痰凝型大鼠慢喉喑具有显著的治疗作用。

大鼠；慢喉喑；夏枯草开音合剂；实验研究

慢喉喑是以声音低沉费力，日久不愈，甚则嘶哑失音的喉科常见慢性疾病，包括现代医学的慢性喉炎、声带小结、声带息肉等喉部疾病。主要表现为声带或室带黏膜毛细血管扩张充血，炎细胞浸润，细胞间质水肿，甚至黏膜肥厚，出现声带小结、声带息肉。随着生活节奏不断加快，人际交往越发频繁，用嗓过度的问题愈发突出，慢喉喑的发病率也越来越高，且慢喉喑病程长，易反复发作，临床上中成药物品种虽多，但多清热解毒类，治疗急喉喑效果好，慢喉喑疗效较差。因此，慢喉喑成为困扰广大患者的常见耳鼻咽喉科疾病。

夏枯草开音合剂是上海市中医医院耳鼻咽喉科主任医师郭裕教授通过长期临床观察，根据多年辨证经验结合喉镜所示局部体征，创制而成的以活血化瘀、祛痰散结为主的院内自制制剂。临床疗效确切，副作用小[1-3]，储存、携带、服用方便。本研究通过建立血瘀痰凝型大鼠慢喉喑模型，研究夏枯草开音合剂对慢喉喑大鼠声带组织充血、间质水肿、炎细胞浸润等方面的治疗效果。以补充夏枯草开音合剂治疗慢喉喑药效学的实验研究，为进一步市场开发奠定基础。现介绍如下：

材料与方法

1 实验动物

SPF级SD大鼠50只，体重400±20g，由上海杰思捷实验动物有限公司提供，合格证号：2010002608336。

2 主要器材和试剂

显微内窥镜、冷光源、光导纤维、电脑显示器、主机、显微咬钳、负压吸引器、大鼠固定板、2ml注射器，体重计、固定皮套若干、干棉球若干、酒精棉球若干、灌胃针、镊子等。

夏枯草开音合剂（上海市中医医院院内制剂，沪药制字Z05190765），10%水合氯醛，生理盐水，10%福尔马林，脱水剂，二甲苯，石蜡，染色液，蒸馏水，乙醇等。

3 方法

①分组：50只SPF级SD大鼠50只，随机分成空白对照组（A组），模型对照组（B组），中药低浓度组（C组），中药中浓度组（D组），中药高浓度组（E组）5组，每组10只。动物喂养在同一标准化条件下(2～3大鼠/笼，温度为20～24℃，相对湿度45%～65%，12小时的光/暗周期)，整个研究中一直提供食物和水。

②模型制作：用10%水合氯醛以0.3ml/100g剂量行腹腔注射进行麻醉，3～4分钟后大鼠进入深睡眠后将鼠固定在鼠固定板上，将上门牙向大鼠背部方向牵拉并固定,下门牙与舌一起用橡皮筋牵拉并固定，使口咽气道充分暴露。在显微内窥镜下，用显微咬钳沿内窥镜旁伸入声门处，迅速钳伤大鼠双侧声带上皮层，成功后使用负压吸引器吸除声门处渗血及痰液，使大鼠呼吸道保持通畅。B-E组40只大鼠在同一条件下由同一人顺次完成。

③给药方法：A组和B组大鼠使用0.9%生理盐水4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）；C组用夏枯草开音合剂按公式换算后，8.3mg/100g生药，0.9%生理盐水稀释为4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）；D组夏枯草开音合剂按公式换算后，16.6mg/100g生药，0.9%生理盐水稀释为4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）；E组夏枯草开音合剂按公式换算后，33.2mg/ 100g生药，0.9%生理盐水稀释为4ml，每天分2次灌胃（7am，4pm）。由实验组四人协作完成，共灌胃30天。控制室温在18～22℃，定时清洁笼具，充足供应大鼠饲料和水。

④制作标本：灌胃30天后处死大鼠，使用10%水合氯醛3ml/100g体重的量进行腹腔注射，3～5分钟后大鼠死亡，在耳显微内窥镜下使用耳显微咬钳取出双侧声带标本，用10%福尔马林固定，常规脱水、浸蜡、包埋程序制作4μm石蜡连续切片，进行HE染色，观察组织充血、间质水肿、炎性细胞浸润、组织增生等指标，按其严重程度分为四个等级：-（未出现）、＋（轻度）、＋＋（中度）、＋＋＋（重度）。

⑤统计学方法。数据统计学分析采用SPSS21.0软件进行，两组间比较采用Wilcoxon秩和检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，检验标准以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

结果

各组大鼠性别、体重无统计学差异，具有可比性。A组及D组各有一只大鼠因操作失误死亡。1组织充血指标，见表1。

表1 空白对照组及模型对照组组织充血指标（n，%）

表1所示为A组和B组在声带充血指标方面的秩和检验，结果提示两组间有统计学差异（P＜0.001），说明在声带组织充血方面造模成功。

表2 模型对照组及不同浓度药物组组织充血指标（n，%）

由表2可知，四组在组织充血方面经秩和检验，结果有统计学差异（P＝0.015＜0.05），说明夏枯草开音合剂能缓解慢喉喑声带组织充血状况。且在本实验中的3种药物浓度中，随着药物浓度增加，治疗效果越好。

2 声带水肿指标

表3 空白对照组及模型对照组声带水肿指标（n，%）

表3所示为A组和B组在声带水肿指标方面的秩和检验，结果提示两组间有统计学差异（P＜0.001），说明在声带组织水肿方面造模成功。

表4 模型对照组及不同浓度药物组声带水肿指标（n，%）

由表4为四组在声带水肿方面的秩和检验，结果显示有统计学差异（P＜0.001），说明夏枯草开音合剂能有效缓解血瘀痰凝型慢喉喑声带组织水肿，且在此3种药物浓度中，随着浓度增加，治疗效果越好。

3 炎细胞浸润指标

表5 空白对照组及模型对照组炎细胞浸润指标（n，%）

表5为两组在炎细胞浸润指标方面的秩和检验，差异具体统计学意义（P＝0.001＜0.05），说明动物造模造成了大鼠声带的炎细胞浸润。

表6 模型对照组及不同浓度药物组炎细胞浸润指标（n，%）

表6为四组炎细胞浸润指标的秩和检验，P＝0.032＜0.05，有统计学差异。表明夏枯草开音合剂能有效治疗大鼠慢喉喑声带的炎细胞浸润状况，并且在本实验的3种药物浓度范围内，随着药物浓度增加而疗效越好。

表7 空白对照组及模型对照组声带组织增生指标（n，%）

经秩和检验，P＜0.001，结果有统计学差异。说明造模后大鼠声带组织增生。

表8 模型对照组及不同浓度药物组声带组织增生指标（n，%）

表9表明，在改善声带组织增生方面夏枯草开音合剂有显著疗效（P＜0.001），此疗效随着药物浓度增高而提高。

各组大鼠声带病理切片结果如下图。

图1 A组大鼠声带病理标本

图2 B组大鼠声带病理标本

图3 E组大鼠声带病理标本

图4 D组大鼠声带病理标本

图5 C组大鼠声带病理标本

讨论

慢喉喑相当于现代医学的慢性喉炎，及声带小结和声带息肉等嗓音疾病。现代医学认为其发病主要是由发声过度或者用声不当、大量吸入有害气体以及呼吸道疾病长期刺激使喉部黏膜血管扩张而成[4，5]。西医多采用抗生素加激素治疗。但慢性喉炎很少有细菌感染，采用抗生素治疗不能起到很好的治疗效果，反而大多数抗生素对人体有副作用，危害人体健康[6]，采用类固醇激素静脉注射和口服治疗慢性喉炎，此类药物在患者声带中浓度低，不能起到很好的治疗效果，且长期使用会产生一些副作用[7]，因此，临床上更倾向于使用疗效确切、副作用低的中药制剂。

祖国医学认为慢喉喑病因病机较为复杂，多责之阴虚、气虚、痰浊、淤血。《素问》中有“五邪所乱，搏阴则为喑。”“中盛脏满，气胜伤恐者，声如从室中言，是中气之湿也。”等记载，认为喑哑与阴虚、痰浊有关。《备急千金要方》:“补肺汤，治肺气不足，咳逆短气，寒从背起，口中如含霜雪，语无音声而渴，舌本干燥方。”指出肺气虚损致喑哑。及至明代，楼英所著《医学纲目》中才首次提出“喉喑”病名。《证治准绳·杂病·第五册》“肺间邪气，胸中积血作痛，失音”，首次提出了淤血致喑。《景岳全书·卷二十八》认为：“五脏之病皆能为喑”。“喑哑之病，当知虚实。实者，其病在标，因窍闭而喑也；虚者，其病在本，因内夺而喑也。”奠定了喉喑“金实不鸣”、“金破不鸣”的理论基础。清朝《临证指南医案·卷二》说：“发声之本在于肾，其标则在乎肺。病有虚实，由咳嗽而起者居多。或肺有燥火，外感寒邪，火气郁而喑者；有肺金燥甚，木火上炎，咽干喉痹而喑者；有风热痰涎，壅遏肺窍而喑者；有嗔怒号叫，致伤会厌者；亦有龙相之火上炎，凌烁肺金，久咳不已而喑者；有内夺而厥，则为喑痱，此肾虚也。”[8]提出了肺阴虚、心火灼肺、肺肾阴虚发为喑哑的观点。导师郭裕教授从慢喉喑患者声带充血、室带肥厚增生等病理改变认为喑哑最常见的病因病机是气滞血瘀痰凝，这与现代名老中医干祖望老先生的观点不谋而合。针对这一病因病机，郭裕教授自创夏枯草开音合剂来治疗慢喉喑，其药物组成为：三棱、莪术、桃仁、红花、葛根、山楂、半夏、陈皮、茯苓、桔梗、夏枯草、海蛤壳、威灵仙、胖大海。方中君药三棱、莪术、桃仁、红花、山楂活血化瘀；臣药夏枯草、半夏、陈皮、茯苓、祛痰消肿；佐以海蛤壳、威灵仙软坚散结；胖大海、桔梗、葛根利咽开音，引药上行为使，全方共奏活血化瘀、祛痰消肿、软坚散结、利咽开音之功。在临床应用中，夏枯草开音合剂治疗慢喉喑取得了较好疗效，为进一步推广应用，并为进一步市场化奠定基础我们补充研究夏枯草开音合剂治疗慢喉喑药效学实验研究。

在国内研究中，大多数学者采用更为方便直观的家兔或狗进行声带病变实验研究，但狗和家兔声带与人类声带存在较大差异，且价格较为昂贵，生长周期长，造模困难等导致观察周期过长[9]。Tateya Tetal等[10]研究表明大鼠声带与人类声带结构更为相似，且大鼠生长周期短，价格低廉，较狗和家兔具有明显的优势，故本实验采用大鼠进行慢喉喑实验研究。目前国内外尚无大鼠慢喉喑造模成功的标准，但有研究表明,喉镜检查结果可作为慢性喉炎血瘀痰凝证症候诊断的客观依据[11]，血瘀痰凝证慢性喉炎声带喉镜主要表现为声带黏膜肿胀、慢性充血，本实验参考文献大鼠声带动物模型建立方法进行大鼠慢喉喑建模[12]，并于造模后第三天内窥镜检查大鼠声带，声带充血、水肿，符合血瘀痰凝型慢性喉炎的诊断。

在本实验中，充血、水肿、炎细胞浸润、组织增生四个指标A组和B组对比均有统计学意义，说明造模成功。从数据看，夏枯草开音合剂对声带充血、水肿、炎细胞浸润、组织增生指标的疗效有统计学差异，并且在本实验采用的3种药物浓度范围内，疗效随着药物浓度增高而提高，说明在一定浓度范围内，随着药物浓度增加，疗效更好。因此我们认为夏枯草开音合剂对血瘀痰凝型慢喉喑具有确切的疗效。

1 郭裕,马凤梅,王丽华.夏枯草开音合剂治疗慢性喉炎40例临床研究[J].河北中医,2012,34(3):337-339.

2 郭裕,马凤梅,王丽华.夏枯草开音合剂治疗慢性喉炎的临床研究[A].世界中联耳鼻喉口腔专业委员会换届大会及第三次学术年会暨中华中医药学会耳鼻喉科分会第十七次学术交流会暨广东省中医及中西医结合学会耳鼻喉科学术交流会论文汇编[C].2011年.

3 王丽华,郭裕,胡蓉.夏枯草开音合剂治疗慢喉喑与中心临床规范化研究[J].中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志,2016,24(4):298-301.

4 曹奕,黄平,蔡建峰,等.畅声饮治疗慢性喉炎49例[J].上海中医药杂志,2012,(12):18-19.

5 胡军朝,张雪英,甄志贤.中西药联合治疗慢性喉炎的临床效果观察[J].临床合理用药,2015,8(10):71-72.

6 胡立新.用喉腔滴药疗法、超声雾化疗法联合音频疗法治疗慢性喉炎的疗效观察[J].求医问药(下半月刊), 2013,11(9):45-46.

7 潘成军,林华.布地奈德雾化吸入治疗急性喉炎的疗效及安全性[J].海峡药学,2011,23(11):119-120.

8 叶天士.临证指南医案[M].北京:人民卫生出版社, 2011:95.

9 Roussencl B,Hirano S,Chan RW,et al.Characterization of chronic vocal fold scarring in a rabbitmodel.Journal of Voice,2004,18(1):116-124.

10 Tomoko Tataya;IchiroTateya,Jin Ho Sohn,Diane M Bless.Histologic characterization of Rat vocal fold scarring.The Annals of Otology,Rhinology＆laryngology, Mar 2005,114,3,Health＆Medical Completepg.183-192.

11 路遥,王嘉玺,裴桂芳,等.慢性喉炎血淤痰凝证证候诊断指标临床流行病学观察[J].北京中医药大学学报, 2013,20(4):26-29.

12 SuzuRit,lonnor NP.Lec K,et al.Laryngenl-respiratory kinematics are impaired in aged rats.Annnls of Otology Rhinology&Laryngology,2002,111(8):684-689.

（收稿：2016-12-01）

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2017.01.006

上海市博士点基金项目（JX007301）

1 上海中医药大学附属市中医医院耳鼻咽喉科

郭裕,主任医师.Email:guoyilun007@sina.com