李言+王利芹+刘延岭+赵聚萍+罗世菊+李晓捷+崔翠菊

摘要：将海带种质的无菌采集与配子体固相保存相结合，对种海带的处理、游孢子的采集、配子体的分离与固相接种等关键步骤进行了研究和改进，建立了一种高效的海带配子体固相保存方法，此方法从源头降低了细菌的污染，减少了配子体保存过程中污染细菌的机会，简化了常规固相保存的菌处理流程，提高了保种效率，有利于固相保存方法的大规模应用。

关键词：海带；配子体；固相保存；无菌采集

海带（Saccharina japonica）属于褐藻门（Phaeophyta）、海带目（Laminariales）、海带科（Laminariaceae）、海带属（Saccharina），为大型经济海藻，19世纪20年代从日本首次引进，并逐渐适应中国海域条件，现在是中国人工栽培历史最长、产量最高的大型经济海藻，在医药、食品、化工等方面都有广泛的应用[1-5]。20世纪70年代建立了海带配子体的采集和培养技术，为海带的种质保存奠定了基础[6-8]。利用传统方法采集的配子体一般要分离到试管中并用棉花塞封口保存，通常每月更換一次培养液，工作量大，操作繁琐，增加了细菌污染和种质丢失、混杂的机会[9]；2005年山东东方海洋科技股份有限公司和烟台大学合作开发了海带配子体固相保存技术[10]，但由于实验室原有配子体克隆保存时间的延长、外界环境及海区水质的变化[11-15]及液相培养开放性操作等诸多因素的影响，至2008年底保存的海带配子体克隆多有细菌污染，部分甚至出现真菌，并且污染菌的组成复杂，不是单一的一种菌[16]。……