成西侠 白建萍 李 静 张 静

(西安第四军医大学西京医院骨科实验室，陕西 西安 710032)

湿化法和非湿化法培养新生兔子的原代成骨细胞效果观察

成西侠 白建萍 李 静 张 静

(西安第四军医大学西京医院骨科实验室，陕西 西安 710032)

目的探讨湿化法和非湿化法培养新生兔子的原代成骨细胞效果。方法选择出生1～3天新西兰白兔20只，取新生兔颅骨1mm2的骨块，进行细胞培养，培养瓶术前1h A组经过血清湿化法处理，B组为经过非血清湿化法处理。结果培养72h后，骨块周围细胞长出，培养7天后骨块周围具有大量细胞长出，形状较为规则，并且细胞贴壁生长；培养10天进行换液传代。传代后观察A组细胞平均贴壁时间明显低于B组，差异具有统计学意义(P<0.05)；传代时A组消化时间与B组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论经过组织贴壁法培养细胞，并且经过血清湿化法处理培养瓶，细胞的贴壁效果更加显著。

原代成骨细胞；湿化法；非湿化

成骨细胞的培养在实验研究中至关重要，如何有效并且花费较少来培养细胞也是研究的重点，原代细胞培养也是大量成骨细胞产生重要手段。本文收取胚胎兔子的原代成骨细胞通过湿化法和非湿化，观察两组培养效果。

1 动物与试剂

1.1 动物分组 选择出生1～3天，体重为0.2kg的新西兰白兔20只，对白兔标号后按照随机数字表法分为A组和B组，每组10只。

1.2 试剂 DMEM高糖培养液(Hycoloe，美国)，100ml青霉素和链霉素(1:4)抗体(需要分装)，胰蛋白酶(南京建成)、胎牛血清(四季青)，L-抗坏血酸50mg等。

1.3 原代成骨细胞提取与培养 取新生1～3天乳兔20只，体积分数75%乙醇浸泡消毒5 min，超净台内无菌取出兔颅盖骨，放入含青霉素、链霉素0.01 mol/L PBS的培养皿内，用眼科解剖器械仔细清除骨膜、血管、结缔组织及透明软骨，无菌冷PBS液冲洗颅盖骨3次。……