杨小健，李亚颖，庞 峰，李国华，彭冬梅，朱 姝，聂 鑫，曹瑞勇，王凤阳，杜 丽

(海南大学热带农林学院，海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海口市动物基因工程重点实验室，海南海口 570228)

羊传染性脓疱病毒CEV112基因的克隆与原核表达

杨小健，李亚颖，庞 峰，李国华，彭冬梅，朱 姝，聂 鑫，曹瑞勇，王凤阳，杜 丽*

(海南大学热带农林学院，海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海口市动物基因工程重点实验室，海南海口 570228)

为了克隆羊传染性脓疱病毒CEV112基因并对其进行原核表达,根据GenBank中CEV112基因序列信息设计1对引物，以CEV基因组为模板，采用PCR扩增出1条大小为867 bp的CEV112基因，将其连接到pMD20-T载体上，构建pMD20-T-CEV112重组质粒，转化到大肠埃希菌(E.coli)DH5α感受态细胞中，提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建重组质粒pET28a-CEV112，转化到E.coliBL21(DE3)感受态细胞中。经IPTG诱导表达，表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明，成功构建了pET-28a-CEV112原核表达载体，并在E.coliBL21(DE3)中表达了CEV112基因，表达的融合蛋白大小约36 ku,且主要以包涵体形式存在，为后续开展CEV112基因的功能研究奠定了基础。

羊传染性脓疱病毒；CEV112基因；克隆；原核表达

羊传染性脓疱(Contagious ecthyma，CE)俗称羊口疮，是由羊传染性脓疱病毒(CE virus，CEV)引起的山羊、绵羊的接触性、嗜上皮性人兽共患传染病[1]。临床上主要以感染动物的唇、鼻孔、口腔黏膜、乳房、阴部等部分皮肤形成红斑、水疱、脓疱、丘疹和疣状痂皮为特征[2]。

CEV属于痘病毒科(Poxviridae)，副痘病毒属(Parapoxvirus)，该病毒基因组大小为130 kb～150 kb，含有16个开放阅读框，编码132个基因，CEV112基因位于病毒基因组反向末端重复序列区[3-5]。……