张金仿 王刚 苏建荣

100050 北京，首都医科大学附属北京友谊医院检验科

轮状病毒(Rotavirus， RV)1973年由澳洲的露丝·毕夏普(Ruth Bishop)发现，为一种双链核糖核酸病毒，由11个编码结构蛋白(VP1-VP7)与非结构蛋白(NSP1-NSP6)的RNA节段组成，属呼肠孤病毒科。G型由糖蛋白VP7定义，P型则由对于蛋白酶敏感的蛋白质VP4定义[1]。

儿童在早期几乎均被轮状病毒感染，在2 岁前，多数儿童会遭受2 次以上的感染。首次感染症状较重，再次感染仍有约20%患儿需接受门诊治疗，其中约3%患儿会因脱水而住院治疗[2]。尽管医疗水平不断提高，轮状病毒感染导致的患儿死亡并未明显下降[3]。轮状病毒仍是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一，感染病程一般为7 d，呕吐2～3 d，腹泻5～7 d，多数伴有发热，严重患儿出现脱水。在全国范围内，每年仍有近1 000万由轮状病毒感染引起的婴幼儿胃肠炎，约占同期胃肠感染性疾病婴幼儿人数的25%[4]。

表2 2015年5月至2017年5月北京友谊医院轮状病毒毒株分型

注：无特殊说明括号内为百分比, 括号外为分型例数

Note. If not otherwise specified, numbers in the parentheses are percentages, and those outside the parentheses are number of cases of a type

目前针对轮状病毒感染无特效治疗方法，接种疫苗仍为预防感染的有效手段，但近几年轮状病毒感染流行特征出现新变化，本文将首都医科大学附属北京友谊医院2015年5月至2017年5月门诊患儿A群轮状病毒感染进行研究。

1 材料与方法

1.1标本来源由北京友谊医院儿科门诊检验师或医生在征得患儿监护人知情同意后，收集其粪便标本，1 813份腹泻病例，其中男性1 075例，女性738例。通过全院HIS系统获得患儿资料如姓名、性别、年龄、起病时间、临床症状(呕吐、腹泻、发热、晕厥等情况)、联系方式、家庭住址等。腹泻诊断标准采用WHO标准，即每日大便次数≥3次，粪便稀薄或含有脓血及黏液，或含有不消化的食物残渣及肉眼或镜检可见的病理性内容物等[5],本研究获北京友谊医院伦理委员会审查通过。

1.2粪便标本收集、保存和筛检采用无菌便盒收集腹泻患儿粪便标本、编号、4 ℃保存(不超过48 h)。采用A群轮状病毒试剂盒(北京万泰生物药业有限公司)进行筛检(严格按照说明书操作)。筛检阳性原始标本重新编号冻存于-20 ℃冰箱，用于核酸提取。

1.3核酸提取与毒株分型原始粪便标本室温解冻后取200 μl，采用核酸提取试剂盒提取病毒核酸(中国台湾Geneaid公司)，提取方法按说明书进行。将得到的RNA上清液于-20 ℃冰箱保存。用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法进行G/P分型，序列的选择及检测流程(SOP) 参照监测方案及相关报道[6-8]。

1.4统计学方法采用Excel 2013软件整理数据，用 SPSS 19.0 软件进行统计学处理及绘制图表，二项分布方法计算阳性检出率置信区间。使用Fisher确切概率法进行率的比较，P<0 .05为差异有统计学有意义。

2 结果

2.1基本检出情况1 813份腹泻标本A群轮状病毒检测阳性319例(占17.6%)，其中水样便243份、稀便47份、粘液便26份。1～ 2 岁患儿阳性构成比最高，为48.3%，6 月龄至12月龄次之，为21.9%。5岁以上患儿22例，5例阳性(22.7%)；最小检出年龄为12 d，最大检出年龄12岁(见表1)。

表1 2015年5月至2017年5月北京友谊医院轮状病毒感染腹泻阳性检出率Tab.1 The results of basic detection of rotavirus infection in Beijing Friendship Hospital 2015-2017

2.2基因分型319例A 群轮状病毒阳性标本常见基因型依次为G9P[8]177例(55.5%)、G1P[8]72例(22.6%)、G3P[8]31(9.7%)；此外，本次研究中未分型标本10例(表2)。

2.3季节性分布2016年2月(46.8%)与2017年2月(47.2%)均为全年月检出率最高月份，2015年9月检出率最低，为0.8%。2015年，在感染性腹泻高发的6～9月轮状病毒检出率明显低于其他月份，而2016年同期检出率均有不同程度的增长。月份检出率差异有统计学意义(P<0.01)。见图1。

图1 2015年5月至2017年5月轮状病毒检出率月分布Fig.1 The monthly distribution of rotavirus examination from 2015 to 2017

3 讨论

轮状病毒是世界范围内重症腹泻的主要病原之一[1]，严重危害人类健康[9]，在欠发达国家, 轮状病毒腹泻成为儿童死亡的主要原因[10]。本研究共收集北京友谊医院儿科门诊2015年5月至2017年5月腹泻病例1 813例，检出A群轮状病毒感染阳性病例319例，占腹泻患儿总数的17.6%，显著低于1998—2001年同医院5岁以下轮状病毒感阳性率[11]。阳性率降低可能与轮状病毒疫苗的使用及儿童监护人卫生意识的普遍提高有关。本研究结果亦略低于耿启彬等[12]2014—2016年传染病监测中的结果。

新生儿从母体所获得的抗体对预防感染有一定保护作用，但由于母传抗体逐渐消退，6月婴儿到2岁儿童轮状病毒感染引起的腹泻比例快速增加。本研究中1～2 岁儿童A群轮状病毒检出率最高，567例病例中154例阳性，检出率达到27.2%。有研究认为随着机体获得性免疫的建立和完善，轮状病毒腹泻在2～5 岁儿童中比例逐渐降低，但本研究结果显示6 月龄至12月龄组与2～3岁年龄组检出率接近，分别为17.5%与16.7%，这与多数学者研究成果不一致[10-13]，其原因有待研究。本研究包含22例5岁以上儿童，阳性病例5例，检出率达22.7%，其中最大检出者12岁。

连续两年的监测发现轮状病毒感染性腹泻在冬季高发，而在婴幼儿感染性腹泻高发的夏季检出率最低。这种季节性分布特征在其他研究中也有所涉及[14-17]，在耿启彬等[12]的报道中显示轮状病毒月检出率最高月份为12月(45.4%)，本研究中显示轮状病毒感染的高峰均为2月份，月检出率为47.2% 和46.8%，这些研究提示秋冬季儿童腹泻轮状病毒感染的可能性较高。研究中发现2017年春季的轮状病毒的检出率明显高于前1年，可能是病毒基因型存在变异，这一现象的出现有待进一步研究。

根据Santos 和Hoshino[18]的研究，世界上近90% 的流行株为常见的的G 亚型和P[8]或P[4]，不同型别的轮状病毒呈现区域高发的流行特征[19]，有学者发现近30%的感染与不常见的组合(如G8 P[6] 或G8 P[4 ]) 有关[16]。本研究中319例阳性标本A 群轮状病毒常见的血清型依次为G9 P[8]177例(55.5%)，G1 P[8]72例(22.6%)，G3P[8]31例(9.7%)，与Zhang 等[20]的研究结果类似。本研究中未分型标本10例，提示G和P之外的其他型别已在中国出现和流行，与国内文献相符[21]。

本研究存在一定局限性。首先，由于患儿症状和医生临床判断不同，并非全部就诊腹泻病例均进行了轮状病毒检测；此研究仅涉及门诊患者，不包含住院病例；仅进行了A 群轮状病毒检测，亚型中仅检测了G1、G2、G3、G4、G8、G9 和P[4]、P[6]、P[8]、P[9]、P[10]、P[11]等亚型。本研究未对PCR扩增产物进一步纯化测序，未能对主要毒株基因型进行进化分析。

综上所述，A群轮状病毒是北京地区5 岁以下儿童腹泻的常见病原体，G9P[8]为主要流行株，轮状病毒腹泻呈现明显的时间流行特征。掌握轮状病毒主要型别及各亚型在人群中流行的特征可以为疫苗的研制提供可靠数据。

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