郭桂元　黄子成　叶源春　陈小令

[摘要] 目的 研究肿瘤坏死因子超家族成员15与溃疡性结肠炎相关性。方法 方便选取2013年1月—2015年12月福建医科大学附属泉州市第一医院收治的103例UC患者作为病例组，抽取同期103名健康体检者做为对照组。应用χ2检验或Fisher确切概率法检验两组基因型频率是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，分析两组间SNPs基因型频率与等位基因频率的差异，并检验肿瘤坏死因子超家族成员15（TNFSF15）基因单核苷酸多态性与UC临床特征的相关性。 结果 TNFSF15基因中rs3810936、rs6478108、rs6478109、rs7848647和rs7869487等5个SNPs基因型频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（P>0.05）；两组5个SNPs位点基因型频率和等位基因频率差异无统计学意义（P>0.05）（基因型频率比较，P=0.685，0.903，0.750，0.808，0.988；等位基因频率比较，P=0.612，0.764，0.620，0.622， 1.000）。结论 TNFSF15基因与中国汉族人群UC的遗传易感性无明显相关性。

[关键词] 溃疡性结肠炎（UC）；遗传易感性；TNFSF15基因；单核苷酸多态性

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）11（c）-0021-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the Tumor necrosis factor superfamily member 15 and UC.Methods Convenient selection 103 cases of Han Chinese patients with UC in the One Hospital of Qian Zhou of FuJian Medical University from January 2013 to December 2015 were selected as the case group，during the same time 103 case of healthy check-ups were selected as the control group. χ2 tests or Fisher exact test were used to test whether the genotype frequencies of the two groups conform the in Hardy-Weinberg law of genetic equilibrium. the difference of SNPs genotypes and allele frequencies in two groups were analyzed ，the relevance of Tumor necrosis factor superfamily member 15 （TNFSF15） gene single nucleotide polymorphism and clinical features of UC were test. Results In TNFSF15，rs3810936、rs6478108、rs6478109、rs7848647 and rs7869487 SNPs genotype frequencies conform Hardy-Weinberg equilibrium（P>0.05）.5 SNPs genotypes and allele frequencies in two groups has no significant difference the difference.（P>0.05）（P=0.685， 0.903，0.750，0.808，0.988 in genotype frequencies；P=0.612，0.764，0.620，0.622，1.000 in allele frequencies）. Conclusion The SNPs of TNFSF15 about Chinese Han people has no significant relations to UC genetic susceptibility.

[Key words] Ulcerative colitis； Predisposition ；TNFSF15；Single nucleotide polymorphisms；Genetic

溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis UC）是一种慢性非特异性炎症性疾病，主要累及直肠和结肠，其与克罗恩（CD）统称为炎症性肠病（IBD）。至今为止，关于溃疡性结肠炎的病因尚无明确结论，研究认为，UC是遗传、感染、环境和免疫等多因素共同作用的结果，其发病机制可以概括为：遗傳易感者在环境因素的作用下及肠道茵群的参与下，启动了肠道免疫机制及非免疫机制，从而导致肠道发生反应。近年来，关于UC的发病与遗传因素的相关性的研究成为临床热点。多项研究提出，UC的发病与ICAM-1、HLA [1]及TNFSF15等多个基因密切相关，已有研究表明，TNFSF15基因是CD的易感基因之一[2-3]，但鲜有TNFSF15基因与UC相关性的研究。该试验以2013年1月—2015年12月该院就诊的103例UC患者为研究对象，选取TNFSF15基因的5个位点，即探讨TNFSF15基因是否为中国汉族人群中溃疡性结肠炎的易感基因之一，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该院该次研究经医院伦理委员会批准，告知患者研究的目的以及方法，获得患者知情同意。研究开展时间为2013年1月—2015年12月，随机抽取该院就诊的103例UC患者为研究对象，均符合“2012年于广州我国炎症性肠病诊断及治疗共识意见”中制订的溃疡性结肠炎诊断标准[4]，排除：①细菌性痢疾、肠结核等感染性结肠炎及结肠CD、缺血性结肠炎、放射性结肠炎等疾病患者；②未定型经肠炎及无法耐受肠镜检查者；③合并大肠肿瘤及其他部位肿瘤者；④合并其他自身免疫性疾病、严重感染以及多脏器功能衰竭者；⑤合并糖尿病、高血压、高脂血症等致动脉粥样硬化的危险因素者；⑥麻风病人、妊娠期及哺乳期妇女、智力障碍及精神类疾病患者。其中男57例，女46例，患者年龄22～64岁，平均年龄为（42.8±6.5）岁。抽取103名同期该院体检中心及门诊的健康者作为对照组，排除IBD史、IBD家族史以及无自身免疫性疾病史患者，其中男51名，女52名，年龄21～68岁，平均年龄为（43.1±6.8）岁。对两组研究对象的一般资料录入至统计学软件中处理，结果显示差异无统计学意义（P>0.05），基本均衡可比。

1.2 实验仪器与试剂

实验仪器及主要试剂由生物生工（上海）股份公司提供

1.3 测序 PCR产物纯化回收试剂盒（生工SK1141）测序

测序图谱（.abl）使用说明：峰图文件（.abl）可用Chromas软件或SeqMan软件打开。序列比对可用SeqMan软件。

1.4 分型数据

TYPER软件分析实验结果，获得分型数据。

1.5 统计方法

采用SPSS 21.0统计学软件分析试验数据。数据中率的比较以χ2检验。年龄采用（x±s）表示， 组间比较采用独立样本t检验，确认两组SNPs位点基因型频率是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，对样本的群体代表性进行分析，分析两组间5个SNPs位点基因型和等位基因频率的差异，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

UC组5个SNPs等位基因1、2的频数（频率）分别为124、82，119、87，117、89，106、100，124、82；对照组等位基因1、2的频数（频率）分别为130、76，123、83，111、95，112、94，12。用χ2检验两组间等位基因频率，P值分别为0.612，0.764，0.620，0.622，1.00，P>0.05，表明两组5个SNPs等位基因频率间差异无统计学意义，见表1。

两组基因型频数：UC组5个SNPs基因型11、12、22的频率依次为34.0%、52.4%、13.6%，15.5%、53.4%、31.1%，28.2%、57.3%，14.6%，29.1%，44.7%，26.2%，35.9%、48.5%、15.5%；对照组基因型频率依次为35.9%、54.4%、9.7%，14.6%、51.5%、34.0%，26.2%、55.3%、18.4%，31.1%，46.6%，22.3%，35.0%、49.5%、15.5%。兩者对比，P值分别为0.685， 0.903， 0.750， 0.808，0.988，P>0.05，表明两组5个SNPs基因型频率间差异无统计学意义，见表2。

3 讨论

溃疡性结肠炎病变部位主要局限于大肠粘膜和粘膜下层，患者临床表现为腹痛、腹泻、粘液脓血便等，伴有发热、贫血、消瘦等症状。相关调查显示，近年来，我国UC发病率有逐渐上升的趋势，成为我国社会卫生关注的问题。TNFSF15基因位于第9号染色体上（9q32），具有23908个碱基，含4个外显子和3个内含子。其蛋白产物肿瘤坏死因子样配体1A（TL1A）可抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡，与特异性受体死亡受体3（DR3）结合后具有活化T细胞、促进炎症因子的分泌等作用，在免疫调节及炎症性疾病发病中发挥着重要作用。UC的发病具有明显家族遗传现象，可能与基因类型及基因突变有关，多项研究表明[5]，TNFSF15基因的单核苷酸多态性与IBD有关，特别是CD有明显相关性。已有研究表明，TNFSF15基因与非犹太高加索人种的UC具有相关性，但与犹太高加索人种UC无显著相关性。相关学者研究报道，TNFSF15基因rs3810936与日本人的UC具有显著相关性[6]。但在朝鲜人群中，TNFSF15基因中8个单核苷酸多态性（SNPs）（rs4574921、 rs10114470 、rs 3810936、rs6478108、rs4979462、 rs7865494、 rs7848647和rs1322057）与UC无显著相关性[7]。王强等[8]研究中，对TNFSF15基因多态性与浙江地区汉族人克罗恩病遗传易感性的相关性进行检测。分别设置克罗恩病组（克罗恩病患者）、对照组 （健康者），设计3个单核苷酸多态性 （rs3810936，rs6478109， rs7848647）目的基因特异性引物，扩增样本中的目的基因测序。结果显示，两组rs3810936，rs6478109，rs7848647 3个位点等位基因的携带频率及基因型频率无明显差异。经多因素Logistic回归分析，TNFSF15的单核苷酸多态性与克罗恩病的临床亚型无显著相关性，但rs3810936与rs6478109有相关性（r=0.802，P<0.05），rs3810936与rs7848647有显著相关性（r=0.793，P<0.05），rs6478109与rs7848647有相关性（r=0.948， P<0.05）。因而认为，TNFSF15的三个单核苷酸多态性（rs3810936，rs6478109，rs7848647）与浙江地区汉族人克罗恩病遗传易感性、临床亚型无显著相关性。综上可说明，UC的遗传易感性具有种族遗传和地区差异。目前，有关于中国北方人群小样该研究显示TNFSF15基因并非UC的易感基因之一。而该研究中选取TNFSF15基因的5个位点，随机抽取该院就诊的103例UC患者为研究对象，另抽取同期体检者作对照，结果显示UC组5个SNPs等位基因1、2的频数（频率）分别为124、82，119、87， 117、89，106、100，124、82；对照组等位基因1、2的频数（频率）分别为130、76，123、83，111、95，112、94，12。经χ2检验，两组间等位基因频率，P>0.05，差异无统计学意义。其中UC组5个SNPs基因型11、12、22的频率依次为34.0%、52.4%、13.6%，15.5%、53.4%、31.1%，28.2%、57.3%，14.6%，29.1%，44.7%，26.2%，35.9%、48.5%、15.5%；对照组基因型频率依次为35.9%、54.4%、9.7%，14.6%、51.5%、34.0%，26.2%、55.3%、18.4%，31.1%，46.6%，22.3%，35.0%、49.5%、15.5%。两者对比，P>0.05，差异无统计学意义。因而该组研究可证实TNFSF15基因与UC无显著相关性（P=0.74）。

综上所述，结合其他省市医院的相关研究可以证实，TNFSF15基因并非中国汉族人群的易感基因之一，但该组研究未将种族遗传、地域差异作为影响因素纳入分析，且该研究样本量少时间较短，因而存在一定的局限性，还需进一步行全国大范围研究及扩大样本量，进一步探寻UC的易感基因，为临床上更好地、有针对性治疗UC提供依据。

[参考文献]

[1] 韩现红，戴新娟.溃疡性结肠炎患者对疾病相关饮食知识、态度、行为及需求调查分析[J].中国实用护理杂志，2015，31（4）：300-303.

[2] Qi， J.-W.，Qin， T.-T.，Xu， L.-X， et al.TNFSF15 inhibits vasculogenesis by regulating relative levels of membrane-bound and soluble isoforms of VEGF receptor 1[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2013，110（34）：13863-13868.

[3] 黄艳，窦传字，刘慧荣，等.表观遗传修饰与溃疡性结肠炎[J].