王成枫　余养生　何燕珠

[摘要] 目的 探討并比较大肠癌中细胞增殖指数TK1、Ki67的表达及临床意义。 方法 整群选取2009年9月—2011年3月该院收治的142例大肠癌患者的手术标本，通过免疫组化来对于大肠癌组织与其周边粘膜组中的TK1的检验结果、大肠癌组织中Ki67的检查情况进行分析。着重分析检查结果与当前病理参数之间的具体关系（差异），并进行相关性和生存分析等工作。 结果 TK1在大肠癌癌组织及周围肠黏膜中的阳性表达率分别为82.4%（117/142）和10.6%（15/142），差异有统计学意义（P<0.05）；大肠癌患者TK1表达在不同的年龄、性别、发病部位、大小、癌组织深度，淋巴结转移程度和TNM分期方面的统计学上没有呈现出显著不同。大肠癌Ki67拥有94.4%（127/142）的阳性表达率，但Ki67在不同分化阶段的癌组织中阳性表达结果差异具有统计学意义 （P <0.05 ），高分化组分别与中、低分化组之间差异有统计学意义（P<0.05 ）。TK1与Ki67之间具有相关性，但关联性不强。大肠癌患者生存时间与TK1无关，与Ki67有关。 结论 TK1可能与大肠癌的发生有关，而与大肠癌的发展及预后无关。Ki67是提示大肠癌预后的指标。细胞增殖指数TK1在大肠癌中的临床价值低于Ki67，其应用价值不大。

[关键词] 大肠癌；TK1；Ki67；免疫组化；预后

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）11（c）-0007-04

[Abstract] Objective To investigate and compare the expression and clinical significance of the cell proliferation index TK1 and Ki67 in colorectal cancer. Methods Group selection 142 cases of colorectal cancer from September 2009 to March 2011 were selected， and the results of TK1 examination in colorectal cancer tissue and peripheral mucosal tissue，Ki67 examination in colorectal cancer tissuewere analyzed by immunohistochemistry. Focus on the analysis of the specific relationship between the results and the current pathological parameters（differences）， and the correlation and survival analysis， etc. Results TK1in colorectal carcinoma and its surrounding normal intestinal mucosa， the positive expression rate reached 82.4%（117/142）and 10.6% （15/142）， there is a significant difference （P < 0.05）； patients with colorectal cancer TK1 expression in different age， gender， onset location， size， tumor tissue depth， lymph node metastasis and TNM staging statistics showed no significantly different. Rate has reached 94.4%（127/142）， the positive expression of Ki67 in colorectal cancer， and it is worth noting is Ki67 in the expression of different degree of differentiation of colorectal cancer is still differences （P < 0.05）， high differentiation group respectively between middle and low differentiation group in a statistically exists with difference （P < 0.05）. There is a correlation between TK1 and Ki67， but the correlation is not strong. The survival time of patients with colorectal cancer has nothing to do with TK1， which is related to Ki67. Conclusion TK1 may be related to the occurrence of colorectal cancer， but it has nothing to do with the development and prognosis of colorectal cancer. Ki67 is an indicator of the prognosis of colorectal cancer. The clinical value of cell proliferation index TK1 in colorectal cancer is lower than that of Ki67， and its clinical application value is not very large.

[Key words] Colorectal Cancer；TK1；Ki67；Immunohistochemistry；Prognosis

当前，得益于分子生物学及肿瘤分子生物学的快速发展，部分蛋白质分子在恶性肿瘤的临床诊断和治疗中都能够得到应用，其临床表现结果也达到了人们预期。相关研究[1-3]表明TK1、Ki67与某些蛋白质分子一样也具有对于各类肿瘤进行有效评估的标记物之一。当前，国内外对于TK1在大肠癌的表达和临床意义方面的研究相对较少，特别是其实际的案例性研究几乎是空白。该论文将应用免疫组化方法检测2009年9月—2011年3月该院收治的142例大肠癌中TK1、Ki67的表达，旨在明确它们与大肠癌之间的预后关系，同时为大肠癌的诊断、治疗等提供一定的参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该文中所有研究对象均是整群选取福建中医药大学附属人民医院肿瘤外科于2009年9月—2011年3月收治的大肠癌病人，共计142例，这也是该次免疫组化检测的主要对象，并将这142例患者癌症组织旁正常粘膜作为论文的分析对照组。总计142例大肠癌患者中男性患者为86例，女性患者56例，其中年龄最小者28岁，最大者84岁，中位年龄为63岁，所有患者均已进行过手术治疗。其中76例直肠癌患者，40例降乙型结肠癌患者及20例升结肠癌、6例横结肠癌患者。样本中，I期结肠癌患者共30例（21.7%），II期共45例（31.7%），III期共60例（42.3%），IV期7例（4.9%）。高中低分化结肠癌患者各占52例、65例、25例。淋巴结有无转移的比重为53.5%：45.1%，此外，也有2例患者为确定淋巴结是否已经转移。浸润深度T1、T2、T3、T4分别为3例、30例、17例、92例。

1.2 试验仪器和试剂

仪器：①全自动脱水机和生物组织包埋机均选用了TS-12N型号全自动脱水机及BM-VIII生物组织包埋机。②LEICA切片子。③恒温培养箱的型号是GHP9080。实验主要试剂包括：①TK1-IgG即用型鼠抗人。②Ki-67单克隆抗体。③即用型免疫组织化学SABC试剂盒。④DAB显色试剂盒。

1.3 方法

以上样本患者的资料保存完整，相关肿块的标本也按照一般性处理方式进行了脱水保存，并通过石蜡包埋的方式进行存放。连续组织切片则采用组织化学染色法进行阳性比对。

1.4 结果判断

TK1的阳性染色大多在细胞的细胞质之中，在细胞膜上并无明显表达，但也有一部分在细胞核上出现了表达结果，且呈现棕褐色或棕黄色以颗粒状态存在。具体的染色强度值为：<10%为阴性（-）；10%～25%为弱阳性（+）；26%～50%为阳性（++）；>50%为强阳性（+++）[4]。

1.5 统计方法

通过SPSS 16.0 for window这一统计学软件对于数据结果进行统计分析：其中对年龄、肿瘤的具体资料选用M， Mean±Sd等描述性分析、率的比较；对TK1、Ki67与年龄等资料的比较选择秩和检验和χ2检验等方法；两个指标之间的相关性应用Spearman相关性检验；生存分析会选取Kaplan-Meier生存曲线来进行确定。在一般情况下均以 α=0.05双侧检验的值为整体检验中的显著性水准。

2 结果

2.1 TK1阳性表达主要位于细胞质

见附图1～5。在上述所有患者的癌组织中TKI的阳性表达率达到了82.4%，肠粘膜的TKI阳性表达率则是10.6%。大肠癌及周围正常组织间的TK1表达差异有统计学意义。而性别、年龄、部位、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、大小、病理类型、分化程度不同的情况下，TK1的阳性表达结果在统计学上差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2 Ki67的阳性表达存在于细胞核

见附图6～8。所有大肠癌病理组织中的阳性高达127例，占比94.4%。 Ki67在不同性别、年龄、部位、病理类型中，差异具有统计学意义（P>0.05 ），但其在不同分化程度下的统计学结果则恰恰相反，详见表2。高与中分化组、高与低分化组之间差异有统计学意义（P<0.05 ），中低分化组之间差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.3 TK1与Ki67之间关系

TK1与Ki67之间具有相关性，但关联性不强。见表4。

2.4 TK1、Ki67与大肠癌患者术后生存时间的关系

142例大肠癌患者中失访13例，129例获得5年以上随访，最长随访时间78个月。Kaplan-Meier生存曲线显示大肠癌患者TK1低表达与高表达生存时间之间差异无统计学意义（P>0.05，见图1，表5），而不同程度表达的Ki67的生存时间之间差异有统计学意义（P<0.05，见表2，表6）。

3 讨论

大肠癌是已知的较为常见的恶性肿瘤之一，随着医疗水平的不断发展，现代医疗技术已经能够对于大肠癌的预后作出贡献，然而很多大肠癌患者依然饱受大肠癌带来的身心折磨，无法进行理想的预后判断和指导治疗，更是会导致病情治疗期间出现反复，甚至转移。正因如此，探寻出新的指标判断预后对于指导医务工作者开展大肠癌的相关治疗具有极强的帮助。

Ki-67抗原和细胞增殖之间存在着一定联系，其是细胞周期相关的增殖细胞核抗原。当前国内外学者的相关研究[5-8]表明：大肠癌组织的Ki67表达要明显的高于腺瘤和其周边粘膜，这表明Ki67与癌组织之间存在着正相关的关系；大肠癌中Ki67与癌症的特性、變化等都有密切联系，但与与性别、年龄等非关键因素之间的相关性较低；大肠癌5年生存率与Ki67有关。提示Ki-67的表达与大肠癌的预后有可能相关。当前，理论界对于关于Ki-67表达与大肠癌临床病例参数之间的管理尚未理清，也没有形成一种认可度高的共识，基于不同侧重进行研究的学者其研究结果通常是相对立、矛盾的，但这也不能否认Ki-67在大肠癌预后上所能作出的贡献。

TK1（胸苷激酶1）与Ki-67一样均为一种跟细胞周期存在密切关系的蛋白质，是一种磷酸转移酶。胸苷激酶在细胞裂变的DNA合成期可以发挥出正向作用。同样也是介导脱氧胸苷进入DNA合成的一种路径。TK1对于DNA补救合成具有关键作用，其能够参与到细胞周期调控和细胞增殖的进程之中。一般来说，正常细胞中TK1存在于G1晚期和S期早期。然而在肿瘤细胞中，S期、G2期的细胞比例明显较高，这也使得TK-1 在S期、G2期的浓度随之上升。理论界的研究普遍认为TK1是一种能够评判肿瘤细胞是否增值的标记物，并在肿瘤的诊断治疗发挥一系列作用。吴鸿雁等人[5]进行的研究表明：TK1在大肠正常黏膜组织、腺瘤以及腺癌三组中的阳性表达率分别为：27.27%（3/11，均为极弱表达）、100%（19/19，其中18例均为低表达）、100%（120/120，中等强度表达43例，高表达10例），差异具有统计学意义（P<0.05）。该研究显示：TK1在大肠癌癌组织及周围肠黏膜中的阳性表达率分别为82.4%和10.6%（15/142），差异有统计学意义（P<0.05）；在性别、年龄、部位、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、大小、病理类型、分化程度不同的情况下，TK1的阳性表达结果在统计学上差异无统计学意义。这与目前的医学界研究结果[9-10]基本一致。尽管该研究中TK1与Ki67之间具有相关性，但其相关性不强；大肠癌5年生存率与TK1无关，与Ki67有关。这说明该研究中TK1与大肠癌的发展可能无关。鉴于此，TK1在大肠癌的预后及预测中很可能无法独立发挥出作用。

综上所述，TK1可能与大肠癌的发生有关，而与大肠癌的发展及预后无关。Ki67是提示大肠癌预后的指标。细胞增殖指数TK1在大肠癌中的临床价值低于Ki67，其应用价值不大。

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[5] 吴鸿雁 ，樊祥山，孟凡青，等. TK1、Ki 67在大肠癌发生发展中作用及其相关性[J]. 临床与实验病理学杂志， 2009， 25（3）：282-286.

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[10] 彭晓飞.血清胸苷激酶（TK1）检测对结肠癌的临床诊断价值[J].中国医药指南，2013，11（10）：160-161.

（收稿日期：2016-08-22）