周学亮，方义湖，赵 勇，邹 斌，徐 华，刘季春

(南昌大学第一附属医院心脏大血管外科，江西南昌 330006)

大鼠Hes1腺病毒表达载体构建及功能鉴定*

周学亮，方义湖#，赵 勇，邹 斌，徐 华，刘季春△

(南昌大学第一附属医院心脏大血管外科，江西南昌 330006)

目的 构建高滴度大鼠Hes1腺病毒过表达载体(Ad-Hes1)。方法 以大鼠cDNA文库为模板，PCR法扩增Hes1，通过定向克隆构建pShuttle-CMV-Hes1穿梭质粒，再以pShuttle-CMV-Hes1为基础，构建pAdeno-Hes1病毒质粒，将pAdeno-Hes1转染293细胞，包装Ad-Hes1，利用改进TCID50法进行病毒滴度测定。Ad-Hes1感染H9c2心肌细胞，Western blot检测Hes1表达。结果 pShuttle-CMV-Hes1穿梭质粒、pAdeno-Hes1病毒质粒构建成功，总滴度为1.6×1011PFU，Ad-Hes1可在H9c2心肌细胞内正常表达，其MOI值为30。结论 Ad-Hes1包装成功，为进一步研究Hes1的心肌保护作用奠定实验基础。

腺病毒科；肌细胞,心脏；Hes1；质粒构建；病毒包装

Hes是果蝇hairy/E(spl)基因家族同系物，作为Notch1信号通路重要靶基因，其通过编码抑制型碱性螺旋-环-螺旋 (basic Helix-Loop-Helix,bHLH)，在调节多种细胞分化、增殖的Notch信号途径中起关键作用[1-3]，并影响细胞决定、发育、分化、增殖、凋亡、黏附及上皮-间质细胞转化[4-5]。研究发现，Hes可与Stat3形成Hes1-Stat3复合物，促进Stat3磷酸化和HIF-1α激活，进而发挥保护作用[6-7]。本研究发现，Hes1可作为介导分子，激活SAFE信号通路，发挥心肌作用[8]。因此本文将构建包装高滴度Hes1腺病毒病毒过表达载体(Ad-Hes1)，为进一步探讨Hes1心肌保护中的分子机制奠定研究基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞及菌株 293细胞购自中科院上海生命科学院细胞库，DH5α超级化学感受态细胞购自汉恒生物科技有限公司。

1.1.2 大鼠cDNA文库及腺病毒载体系统 大鼠cDNA文库购自TaKaRa公司；pShuttle-CMV重组穿梭质粒、pAdeno质粒购自汉恒生物科技有限公司。……