王 凯，冯永杰，付晓莹，陆瑶瑶，梁宏德，杨玉荣

ToxoDB#17型弓形虫卵囊对昆明小鼠致病性的研究

王 凯，冯永杰，付晓莹，陆瑶瑶，梁宏德，杨玉荣1

目的 为探究ToxoDB#17型弓形虫对昆明小鼠的致病特点。方法 分别选择<1个，1个，101个，102个，103个，104个，105个，106个ToxoDB#17型弓形虫卵囊灌胃小鼠，观察小鼠的临床症状，采用改良凝集试验、HE和IHC方法研究弓形虫的感染率，小鼠生存率及其大脑内的包囊数量。结果 ≥104个卵囊组小鼠在攻虫后出现一过性的精神沉郁，弓背，被毛逆立现象，其余组精神状态正常；≥102个卵囊可引起小鼠100%感染，感染小鼠的成囊率为2.38%(1/42)，感染小鼠生存率为85.71%(36/42)，存活时间≥360 DPI。结论 ToxoDB#17型弓形虫对昆明小鼠的致病力弱，包囊形成率低。

ToxoDB#17型弓形虫；昆明小鼠；包囊；致病性

刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)是一种呈世界性分布的细胞内寄生原虫，可感染几乎所有恒温动物，引起弓形虫病。不同基因型弓形虫对昆明小鼠的致病性不同[1]。我国目前为止共分离到154株弓形虫，11个基因型，其对昆明小鼠的致病性研究仅有少量报道。本试验首次将分离于河南猫体内ToxoDB#17型弓形虫虫株，采用改良凝集试验(modified agglutination test，MAT)，常规病理学方法，HE和IHC染色技术，研究这一虫株对昆明小鼠的致病性特点，丰富中国虫株对小鼠致病特性的认识，为弓形虫卵囊入侵机制及防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 弓形虫卵囊及主要试剂 ToxoDB#17型弓形虫虫株分离于河南省郑州市宠物市场猫的组织，猫粪便中卵囊的分离及纯化具体操作方法参照Dubey JP (1987)[2]，ToxoDB#17型弓形虫卵囊见图1A。兔抗弓形虫多克隆抗体、弓形虫抗原受赠于美国农业部Dubey实验室，小鼠Specific HRP/DAB(ABC)Detection IHC kit 购自abcam公司(货号：ab64264)。

1.2 试验动物及处理 6～8周龄健康清洁级昆明小鼠，购于郑州大学实验动物中心。小鼠随机分为9组(8个感染组，1个对照组)，每组5～8只，分笼饲养，正常采食饮水。对照组小鼠灌胃无菌生理盐水1ml/只，感染组小鼠每只分别灌胃<1个、1个、101个、102个、103个、104个、105个、106个的ToxoDB#17型卵囊溶液。104个、105个、106个每组8只小鼠，其他每组5只小鼠(表1)。感染后60 d(60 DPI)，采集小鼠血清，试验组小鼠乙醚麻醉每组处死5只。其他小鼠每日观察临床表现，分别在120 DPI，180 DPI，240 DPI，300 DPI，360 DPI采集小鼠血清。每日观察记录发病和死亡情况。对自然死亡和处死的小鼠检查并记录肺脏、淋巴结中是否感染有弓形虫；取大脑，计数大脑包囊数量，自然死亡小鼠的全部组织固定于10%中性福尔马林溶液中，常规方法制做石蜡切片，进行HE及弓形虫抗原IHC染色，检查其死亡原因。

1.3 试验方法 血清弓形虫IgG抗体检测采用MAT方法[2]。小鼠大脑包囊计数，采用压片显微镜检查方法[3]。

1.4 数据处理 采用Excel 2007收集整理数据，GraphPad Prism 5.0制图。……