易方浩,张俊爱,黎四平,贾 岩,陈 晨,余诗炎,王 鑫,代友超,庄泽岗,郑碧英,徐军发

4种血清型登革病毒多表位重组抗原的表达及血清学初步评价

易方浩1,张俊爱1,黎四平2,贾 岩1,陈 晨1,余诗炎1,王 鑫1,代友超1,庄泽岗1,郑碧英1,徐军发1

目的 在原核表达系统中对登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非结构蛋白1(NS1)融合的B细胞抗原表位进行表达、纯化及血清学评价。方法 将B细胞抗原表位用形成α螺旋的连接肽(EAAAK)2作为接头，串联合成1条全新的多表位融合重组基因rE，将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中，转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达融合蛋白，用镍柱对重组蛋白纯化，并用SDS-PAGE 和Western blot方法鉴定表达产物。以融合蛋白为抗原，用间接ELISA检测登革热病人血清IgM抗体。结果 重组表达载体pET28a-rE构建成功，并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在，用镍柱纯化获得高纯度的目的蛋白，SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符，建立的间接ELISA具有较高的准确性。结论 原核表达的登革病毒多表位融合蛋白具有良好的血清学检测价值。

登革病毒;抗原蛋白;原核表达;血清学评价

登革热是由有4种血清型的登革病毒引起，通过伊蚊叮咬而传播的虫媒病毒传染病[1]，预计全球有大约一半的人口处于感染的风险，每年有3.9亿登革热感染者[2-3]。登革病毒4种不同血清型(DENV-1～4)分布在全球的热带和亚热带地区，每一种血清型都可引起严重的疾病[4]，对于登革热传染病没有特效的治疗[5]，目前已有全球获批的首个登革热疫苗Dengvaxia可用于预防登革热[6]。……