马晓萍， 高晓勤， 丁贤胜， 戴研平

(1贵州医科大学组织胚胎学教研室，贵州 贵阳 550004； 2遵义医药高等专科学校组织胚胎学教研室，贵州 遵义 563006； 3六盘水市人民医院病理科，贵州 六盘水 553000)



沉默附睾P34H基因对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶活性的影响*

马晓萍1, 2， 高晓勤2△， 丁贤胜3， 戴研平1

(1贵州医科大学组织胚胎学教研室，贵州 贵阳 550004；2遵义医药高等专科学校组织胚胎学教研室，贵州 遵义 563006；3六盘水市人民医院病理科，贵州 六盘水 553000)

目的： 通过慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)敲低P34H表达,分析其对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶(HYD)活性的影响。方法: 构建3种附睾精子P34H shRNA慢病毒表达载体GV-P34H-shRNA-1、GV-P34H-shRNA-2和GV-P34H-shRNA-3，提取阳性克隆质粒测序，转染HEK293T细胞，生产慢病毒颗粒。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别注入小鼠附睾中，用real-time PCR和Western blot法分别检测其对P34H mRNA和蛋白的沉默效果。采用免疫荧光法观察P34H蛋白在小鼠精子上的定位，改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测小鼠精子HYD活性(HYD阳性反应率和HYD活性强度)。结果: 测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功。感染小鼠附睾后，P34H的mRNA及蛋白表达量均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P<0.05)；其中以GV-P34H-shRNA-1作用最为显著，精子P34H阳性表达率和HYD活性均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P<0.05)，而阴性感染组和正常对照组相比差异无统计学显著性。结论: 附睾P34H基因沉默可抑制小鼠附睾中精子P34H阳性表达率和HYD活性。

P34H; RNA干扰; 透明质酸酶

近年来，附睾生理学及生物化学研究越来越被学者们重视。附睾是哺乳动物精子成熟、获得受精及运动能力、贮存和保护精子的场所；睾丸中的精子只有在通过附睾的过程中,与管腔微环境中特异表达的蛋白质不断地相互作用,才能最终获得前向运动能力、透明带结合能力及受精能力[1]。……