李佶操，王奉光，王 葵，张 渝，邓 睿，盛艳梅

成都医学院 药学院(成都 610083)

·论 著·

基线等比增减设计法优选黄芪注射液及灯盏细辛注射液治疗气虚血瘀证小鼠联合用药配比*

李佶操，王奉光，王 葵，张 渝，邓 睿，盛艳梅△

成都医学院 药学院(成都 610083)

目的 考察不同配比的黄芪注射液、灯盏细辛注射液联合使用对气虚血瘀证小鼠凝血功能及血脂水平等的影响，优选出最佳配比。方法 建立气虚血瘀模型小鼠，结合基线等比增减设计法，将实验小鼠分成正常对照组、模型对照组及黄芪-灯盏细辛注射液(10∶0、10∶3、10∶6、10∶10、1∶10、0∶10)配比组，观察给药前后小鼠体征变化，并检测小鼠凝血时间及血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C水平。结果 与模型组比较，除黄芪∶灯盏(10∶0)差异无统计学意义(P>0.05)外，其余各配比组均能显著延长凝血时间，差异有统计学意义(P<0.01或0.05)；各配比组除对HDL-C无明显影响外，均能显著降低TG、TC、LDL-C水平，差异有统计学意义(P<0.01或0.05)，均以黄芪∶灯盏(10∶6)组作用明显。结论 黄芪-灯盏细辛注射液联用能改善小鼠的气虚血瘀症状，较单用效果好，最佳配比为黄芪∶灯盏(10∶6)。

黄芪注射液； 灯盏细辛注射液； 联用； 气虚血瘀证

缺血性脑病，中医称为“缺血性脑卒中”，好发于中老年人，是人类最常见的三大致死原因之一[1]。中医认为气虚血瘀是缺血性脑病的主要病机，临床常以益气活血为其治法，将黄芪和灯盏细辛注射液联合应用，在改善患者神经损伤引起的多种临床症状，促进神经功能恢复方面取得了优于单用组或西医对照组的疗效[2-5]，但二者的最佳联用比例尚不明确。本研究以“黄芪-灯盏细辛”合用的益气活血作用为研究重点，拟建立气虚血瘀证动物模型，结合基线等比增减设计法研究黄芪和灯盏细辛联用对气虚血瘀模型小鼠的疗效，并优选出最佳配比，以期为后续研究及气虚血瘀证缺血性脑卒中的临床合理用药提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂 黄芪注射液(黑龙江珍宝岛药业股份有限公司生产，批号：20150409)，灯盏细辛注射液(云南生物谷药业股份有限公司生产，批号：20150532)；脂肪乳剂(每100 mL由猪油 20 g、胆固醇 10 g、胆盐 2 g、吐温-80 20 mL、1，2-丙二醇 20 mL及蒸馏水适量配制而成)。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒(批号：20151027)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(批号：20151027)，总胆固醇(TC)试剂盒(批号：20151026)，甘油三酯(TG)测试盒(批号：20151028)均购自南京建成生物工程研究所。

1.1.2 实验动物 健康雄性ICR小鼠数只，体质量(22±2)g，由四川省医学科学院·四川省人民医院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK[川]2013-15，实验前适应性饲养1周。

1.1.3 主要仪器 酶标仪(Biotek Powerwave XS2)、离心机(北京医用离心机厂)等。

1.2 实验方法

1.2.1 气虚血瘀证模型小鼠的制备[6-8]将实验小鼠每晚22:00给予饲料2 g/每只/每天，上午10:00按5 mL/kg灌胃脂肪乳后，11:00左右游泳，分批置于水深约30 cm,水温(14.0±0.5)℃水中，以木条拨打强迫其不断游泳直到小鼠3～5 s无法浮出水面，将小鼠捞出，不予保温措施及擦拭水迹，关闭门窗任其暴露于空气中自然晾干，连续造模10 d。

1.2.2 分组与给药 采用基线等比增减设计法[9-10]进行动物分组与给药，将上述造模成功的小鼠随机分为模型对照组、试验组(按黄芪注射液与灯盏细辛注射液联合用药配比的不同共分为7组，具体配比见表1)，另设正常对照组。每组10只，药物剂量参照临床用药剂量换算，给药组按照0.3 mL/100 g相应药液于每晚18:00腹腔注射给予。模型对照组与正常对照组均给予相应体积生理盐水，连续给药5 d。

1.3 评价指标

1.3.1 体征观察 观察给药前后各组小鼠的活动情况、精神、毛发、粪便、舌质、眼球颜色、尾部是否出现瘀点或瘀斑等症状。

1.3.2 凝血时间测定 末次给药后采用毛细玻璃管从眼眶后静脉丛取血，血液进入吸管立即计时，每隔10 s折一小段，直至折断处出现血丝，即记录为凝血时间。

1.3.3 生化指标检测 第2天采用摘眼球取血法收集血液，离心(3 000 r/min，10 min)，保存血清备用。分别按照试剂盒说明书方法检测TG、TC、LDL-C、HDL-C含量。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 体征观察

参照任建勋等[8]的评价方法，造模成功的小鼠均存在不同程度气虚血瘀表现：如精神萎靡、毛发枯黄或结穗或脱落、稀便等气虚症状明显，且伴舌质暗淡或绛紫、尾部出现瘀点或瘀斑等血瘀表征，给药5 d后各药物组的气虚血瘀症状均较模型组有较明显改善。

2.2 不同给药组小鼠凝血时间比较

末次给药后每组随机选取6只小鼠，采用毛细管法进行凝血时间测定。结果显示：模型组的凝血时间明显低于正常组，表明该模型制备是成功的；与模型组比较，黄∶灯(10∶0)对凝血时间无明显影响，差异无统计学意义(P>0.05)，其余各配比组均能明显延长凝血时间，差异有统计学意义(P<0.05或0.01)；与黄∶灯(10∶6)比较，各受试药组除(10∶1)、(10∶10)组无明显差异外，其余组均有统计学意义，故对凝血时间的影响，尤以黄∶灯(10∶6)作用更明显(表1)。

2.3 不同给药组小鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C水平的比较

将各组血清样品分别按照TG、TC、LDL-C、HDL-C试剂盒说明书方法检测，并计算。结果显示：与正常组比较，模型组小鼠的TG、TC、LDL-C明显升高，而HDL-C明显降低，差异有统计学意义(P<0.01)，表明采用寒湿饥饿加高脂饲料喂养制作的气虚血瘀模型是成功的。与模型组比较，除对HDL-C无明显升高作用外，各配比组均能明显降低TG、TC、LDL-C水平，且差异有统计学意义(P<0.01或0.05)，联用较单用疗效优，综合评价以黄∶灯(10∶6))组作用更明显(表2)。

表1 不同给药组小鼠凝血时间比较

注:与模型对照组比较，#P<0.05,##P<0.01；与黄∶灯(10∶6)比较，*P<0.05,**P<0.01

表2 不同给药组小鼠TG、TC、LDL-C、HDL-C的比较

注:与模型对照组比较，#P<0.05,##P<0.01

3 讨论

黄芪具有益气固表、利水消肿等功效，其主要含有黄芪皂苷、多糖、黄酮等多个活性成分，现代临床常用黄芪注射液治疗缺血性脑血管疾病，有较好疗效，其主要物质基础为皂苷类成分。灯盏细辛具有祛风散寒，活血通络止痛的功效，其主要含有黄酮、咖啡酸酯、酚酸类化合物等，在心脑血管疾病中疗效确切。临床在益气活血法指导下，将黄芪、灯盏细辛注射液联合应用于脑卒中患者，在改善神经损伤引起的多种临床症状方面取得了优于单用组或西医对照组的疗效。

本研究考察了灯盏细辛注射液与黄芪注射液联用对气虚血瘀证小鼠凝血功能及血脂水平等的影响，结果表明两药不同配比对气血血瘀小鼠的凝血时间及TG、TC、LDL-C等指标均有不同程度的改善作用，且两药联用较单用组作用明显，其中相对最佳配比为黄∶灯(10∶6)，体现了益气活血法改善气虚血瘀证的协同作用，为后续课题的开展奠定了实验基础。课题组将在该模型基础上建立脑缺血再灌注损伤动物模型，进一步评价黄芪与灯盏细辛联用对气虚血瘀证脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用，并确证其最优配比及相关机制。

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The Effect of Different Ratios of Astragalus Injection and Erigeron Breviscapus Injection on the Mice with Syndrome of Qi Deficiency and Blood Stasis on the Basis of Increase-decrease Baseline Geometric Proportion Design Method

LiJicao,WangFengguang,WangKui,ZhangYu,DengRui,ShengYanmei△.

SchoolofPharmacy,ChengduMedicalCollege,Chengdu610083,China

Objective To observe the effect of different ratios of astragalus injection (AT) and Erigeron breviscapus injection (EB) on the mice with syndrome of Qi deficiency and blood stasis, and explore the optimum ratio. Methods The mouse models with syndrome of Qi deficiency and blood stasis were established and randomly divided into the control group, the model group, and the treatment groups with different AT-EB ratios including 10∶0, 10∶3, 10∶6, 10∶10, 1∶10, 0∶10 on the basis of the increase-decrease baseline geometric proportion design method. Then the clotting time and the TG, TC, LDL-C and HDL-C levels of serum were detected．Results Compared with the model group, The treatment groups with different AT-EB ratios can significantly prolong the clotting time (P<0.01 or 0.05) except that with the ratio of 10∶0. the level of HDL-C wasn′t changed significantly, but the levels of TG, TC and LDL-C decreased significantly in all the treatment groups with different ratios (P<0.01 or 0.05), and the treatment group with the ratio 10∶6 showed better effect than the other treatments. Conclusion The combined therapy of astragalus injection and erigeron breviscapus injection can improve the syndrome of Qi deficiency and blood stasis in mice to different degrees, and the combined administration has better effect than the single one. The optimum ratio is 10∶6.

Astragalus injection; Erigeron breviscapus injection; Combination; Syndrome of Qi deficiency and blood stasis

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161125.1107.012.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.06.004

国家自然科学基金资助项目(No:81403311); 国家级大学生创新创业训练项目(No:201513705026)

R 285.5

A

△通信作者： 盛艳梅，E-mail：467131233@qq.com