王玉瑶，王玉璇，翟翔，刘铭，解军

心肌细胞中微小核糖核酸 let-7c对肌营养素基因表达的调控作用

王玉瑶，王玉璇，翟翔，刘铭，解军

目的：探讨心肌细胞中微小核糖核酸（miR）let-7c（miR-let-7c）对肌营养素基因表达是否具有调控作用以及可能的作用机制。

微小核糖核酸；肌营养素；核转录因子-κB

(Chinese Circulation Journal, 2016,31:1215.)

微小核糖核酸（miR）通过降解靶mRNA或抑制靶mRNA的翻译来调控基因表达[1]。最近研究发现miR-let-7家族在心脏组织中高表达，参与许多重要的心脏功能调控[2]，miR-let-7c可能在心肌肥厚中发挥重要作用，但其具体作用靶标和机制仍不清楚[3]。肌营养素（myotrophin, MTPN）是从原发性高血压大鼠的心脏中分离得到的低分子量蛋白，经研究证实肌营养素参与心脏肥厚的起始环节，并在心脏肥厚向心力衰竭的发展过程中发挥重要作用[4-7]。生物信息学分析表明，肌营养素mRNA 的3'非编码区（3'-UTR）可能受miR-let-7c调控，但尚少有切实实验证据的支持。我们拟构建携带有肌营养素mRNA 3'-UTR的重组质粒载体，与miR-let-7c前体共同转入Hela细胞，采用双荧光素酶报告系统分析miR-let-7c对肌营养素表达的调控作用。进一步通过转染大鼠心肌细胞H9c2，研究miR-let-7c上调后对肌营养素基因在心肌细胞中表达的影响，以及对肥厚关键信号分子核转录因子-κB（NF-κB）活性的调控作用，研究结果有助于阐明miR-let-7c在心肌肥厚中的作用机制。

1 材料和方法

实验材料和试剂：胰蛋白酶购自Sigma公司（美国）；胎牛血清、达尔伯克改良伊格尔培养基（DMEM）、转染试剂Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司（美国）；miR-let-7c前体及抑制剂、pMIRREPORTTMmiRNA表达报告载体购自Ambion公司（美国）；Taqman 实时定量聚合酶链式反应（PCR）相关试剂购自ABI公司（美国）；……