李永梅，冯玉杰，曹新文，赵李靖，祝建波，闫洁

(石河子大学生命科学学院，新疆 石河子 832000)



能源橡胶草GGPPS基因启动子的克隆及瞬时表达研究

李永梅，冯玉杰，曹新文，赵李靖，祝建波，闫洁*

(石河子大学生命科学学院，新疆 石河子 832000)

以多年生宿根型草本植物橡胶草为材料，根据已获得的橡胶草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase，GGPPS)基因序列设计引物，采用TAIL-PCR扩增到GGPPS基因5′上游大小为1131 bp的序列。采用PlantCare和PLACE软件分析，表明该序列不仅具有启动子的基本元件，同时还有与多个器官特异表达元件以及与胁迫相关的顺式作用元件，命名为pTkGGPPS(GenBank：KT901796)。将该序列代替pCAMBIA1304质粒上的CaMV 35S启动子序列，以GFP基因作为报告基因，构建pCAMBIA1304-pTkGGPPS-GFP植物表达载体，利用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞，结果表明，该启动子能够驱动GFP基因表达，具有一定的活性。TkGGPPS基因启动子克隆及瞬时表达为橡胶草中橡胶合成及组织特异性研究奠定了基础。

橡胶草；GGPPS基因；TAIL-PCR；启动子；序列分析；瞬时表达

启动子是位于结构基因5′端上游的DNA序列，能够活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确结合并具有转录起始特异性。启动子(promoters)就像“开关”，决定转录的方向和效率，控制基因表达的起始时间、空间和表达程度。目前，大多数转基因植物所用的启动子是组成型启动子(如烟草花叶病毒35S启动子)。组成型启动子是基因工程中应用最早，且应用最为广泛的一类启动子。它能够在组织中非特异性和高效表达，外源基因的高效表达，能够满足人类的需求；但是，外源基因的非特异性表达和异源基因的高效表达，打破植物原有的代谢平衡，影响植物的正常生长[1]。……