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(1.南华大学附属第二医院泌尿外科 湖南 衡阳 421001;2.南华大学附属第二医院检验科;3.南华星辉生殖健康专科医院;4.南华大学附属第二医院妇产科)

·临床医学·

冻融周期中单个优质囊胚移植的应用

廖宏庆1,3，周俊2,3*，周静3,4，李梅清3,4

(1.南华大学附属第二医院泌尿外科 湖南 衡阳 421001;2.南华大学附属第二医院检验科;3.南华星辉生殖健康专科医院;4.南华大学附属第二医院妇产科)

目的探讨冻融周期第5天单个优质囊胚复苏后移植的临床价值。方法回顾性分析2013年1月至2014年12月在我院接受首次复苏优质囊胚移植治疗的患者临床资料，按移植胚胎数分为单囊胚移植组(n=65)、双囊胚移植组(n=240)，比较两组的妊娠率、种植率、多胎率、移植胚胎利用率。结果两组的临床妊娠率差异无统计学意义(P>0.05)；单囊胚移植组种植率显著高于双囊胚移植组，差异有统计学意义(P<0.01);单囊胚移植组移植胚胎利用率显著高于双囊胚移植组，差异有统计学意义(P<0.05)；单囊胚移植组多胎率显著低于双囊胚移植组，差异有统计学意义(P<0.01)。结论冻融周期行单个优质囊胚移植可以保证临床妊娠率，明显降低多胎率，提高胚胎利用率，获得较满意的临床结局。

冻融单囊胚移植； 临床妊娠率； 多胎率； 胚胎利用率

近年来，辅助生殖技术(ART)被广泛应用于治疗不孕不育症，然而其安全性一直是生殖医学工作者关注的焦点。多数生殖中心通常采用移植多个胚胎的方案以期获得满意的临床妊娠率，但是移植多个胚胎常常导致多胎妊娠的增加。随着胚胎培养技术的进步，囊胚培养得到广泛的应用，并日益成为IVF实验室的常规技术，且囊胚培养已被证实能够有效筛选具有发育潜力的胚胎[1]。为探讨既可以减少多胎妊娠，又不降低妊娠率的移植策略，本中心对冻融周期中首次移植第5天优质囊胚的患者按单囊胚移植和双囊胚移植分组进行回顾性分析，观察其妊娠结局。

1 资料与方法

1.1研究对象对分组回顾性分析2013年3月至2014年12月在南华星辉生殖健康专科医院进行常规体外受精/卵胞浆内单精子注射，首次行冻胚移植(FET)，移植的胚胎均为第5天评级3BB及以上的患者。移植一枚优质囊胚为单囊胚移植组，共计65例；移植两枚优质囊胚为双囊胚移植组，共计240例。

1.2内膜准备与移植时间内膜准备方法有自然周与人工周期两种，自然周期治疗用于月经周期规则/有排卵/卵泡监测内膜发育良好者(厚度>8 mm)采用；对于自然周期失败/无排卵/既往排卵障碍者采用人工周期治疗。所有胚胎均在排卵或肌注黄体酮后第4天进行解冻，培养2～4 h后移植。

1.3胚胎评级与分组囊胚评级采用Gardner评分标准并稍加以修改，根据囊胚腔的大小分为1～6期：1期为早期囊胚：胚胎开始形成囊胚腔但囊胚腔小于胚胎体积的50%；2期囊胚：囊胚腔超过胚胎体积的50%但未完全占据整个胚胎；3期囊胚：囊胚腔占满了整个胚胎；4期囊胚：囊胚腔扩张，胚胎体积明显增大，透明带变薄；5期囊胚：部分外胚滋养层细胞开始从透明带孵出；6期囊胚：囊胚完全从透明带中孵出，脱离透明带。对于3期及以上的囊胚针对内细胞团和滋养层细胞质量进行评价，根据内细胞团评级分为A、B、C三级：A级：细胞数多且紧密成团；B级：细胞数较少，疏散或成群；C级：细胞数很少，有碎片、色泽发黑。根据囊胚最大直径的滋养外胚层细胞数目评级分为A、B、C三级：A级：3级囊胚滋养层细胞≥10个；4～6级囊胚滋养层细胞≥15个；B级：3级囊胚滋养层10>细胞数≥5个，4～6级囊胚滋养层15>细胞数≥10个；C级：3级囊胚滋养层细胞数<5个，4～6级囊胚滋养层细胞数<10个；评级≥3BB的囊胚为优质囊胚。

1.4囊胚的冷冻与复苏所有胚胎在冷冻前进行评级，冷冻时采用激光打孔法对囊胚进行人工皱缩，待囊胚皱缩后置于Kitazato 公司玻璃化冷冻套装平衡液(ES)中5～10 min，随后将胚胎转移至玻璃化冷冻液( VS) 中，尽量少带ES并快速换液平衡，60 s以内将胚胎点在冷冻钩(CMV)上并投入液氮中，套好套筒并保存，每支CMV的胚胎数目不超过3枚。解冻复苏液采用Kitazato 公司Vitrification warming 套装，囊胚复苏时将CMV取出后直接浸入37 ℃ 的1号复苏液体(TS)中1 min，随后将胚胎移入室温平衡的2号复苏液(DS)中3 min，其后经室温平衡的3号、4号复苏液(WS1、WS2)各5 min，将胚胎放入37 ℃ 的G2.5培养皿，放入培养箱内培养。培养2 ～ 3 h后观察囊胚腔开始扩张的囊胚适合移植。

1.5妊娠判定移植28天后B超下见孕囊为临床妊娠。

1.6计算与统计分析妊娠率为妊娠周期数/移植周期数×100%；着床率为着床胚胎数/移植胚胎数(单胚胎双胎计为一枚胚胎着床)×100%；多胎率为两个及两个以上胎儿周期数/妊娠周期×100%，单卵双胎发生率为发生单卵双胎的周期数/妊娠周期数×100%；移植胚胎利用率为发育成胎儿的胚胎数/移植胚胎数×100%

2 结 果

2.1两组一般情况比较入选周期中单囊胚移植组65个周期，双囊胚移植组240个周期，单囊胚移植的比例为21.3%(65/305)，两组间平均年龄、BMI、不孕年限、自然周期比例、移植前E2水平、P水平、内膜厚度均无显著性差异(P>0.05)，可以认为组间的基本特征无明显差异(表1)。

表1两组一般情况比较

分组n年龄(岁)不孕年限(年)BMI自然周期(例，%)移植前E2(pg/mL)移植前P(ng/mL)移植日内膜厚度(mm)单囊胚组6531．7±4．84．1±3．021．9±3．352/65(80．0)215．1±202．212．0±5．010．5±2．2双囊胚组24031．0±4．24．2±3．421．7±2．9166/240(69．2)204．2±147．510．9±5．610．6±2．1T值或χ2值1．347-0．2900．3432．9440．4841．346-0．392P值>0．05>0．05>0．05>0．05>0．05>0．05>0．05

2.2两组妊娠结局比较两组间的妊娠率、单卵双胎发生率均无显著性差异(P>0.05)，种植率、多胎率有显著性差异(P<0.01)，移植胚胎利用率有显著性差异(P<0.05)(表2)。

表2两组妊娠结局比较

分组周期数妊娠率种植率多胎率单卵双胎发生率移植胚胎利用率单囊胚组6549/65(75．4)49/65(75．4)1/49(2．0)1/49(2．0)41/65(63．1)双囊胚组χ2值240185/240(77．1)0．83279/480(58．1)7．11794/185(50．8)38．2084/185(2．2)235/480(49．0)4．565P值>0．05<0．01<0．01>0．05<0．05

3 讨 论

目前的观点普遍认为，ART技术的目的是获得健康的新生儿以及尽可能地减少并发症的发生，meta分析结果显示多胎妊娠能显著增加胎膜早破、妊娠期高血压、妊娠期糖尿症、早产、低体重儿、极低体重儿、先天畸形等疾病[2]，而且加重患者的经济负担[3]。降低多胎妊娠最为有效的措施就是减少移植胚胎数目，随机对照的研究结果显示，与双胚胎移植(Double Embryo Transfer，DET)相比，选择性单胚胎移植(Single Embryo Transfer，SET)能够显著的降低多胎出生率且并不影响累积妊娠率，同时能显著降低胎儿与新生儿死亡率[4]。目前在欧洲一些国家通过立法限制移植胚胎数目，美国辅助生殖协会于2013年修订了胚胎移植数目的指南，建议35岁以下的患者采取单胚胎移植[5]，我们国家对单胚胎移植目前没有相关的指南或规定，在我们中心冻融周期优质囊胚移植中单囊胚移植的比例为21.3%(65/305)。

我们对在本院首次冻胚周期行优质囊胚移植的患者按胚胎移植数目分组进行分析，结果显示单个优质囊胚移植与双优质囊胚移植在妊娠率方面无显著差异(75.4%VS 77.1%，P>0.05)，但能显著降低多胎率(2.0%VS 50.8%，P<0.01)。Joyce Chai等[6]对206名35岁以下的患者进行研究，74名患者实施SET，132名患者进行DET，结果显示在两组患者在临床妊娠率、种植率、流产率无差异,SET组多胎率显著降低。Kate Devine[7]对1696位冻囊胚移植的患者进行了回顾性分析发现：与双胚胎移植相比，SET组能显著降低多胎妊娠率(0.6%VS 33%)、同时减少早产率与低体重儿的比例；两次SET与双胚胎同时移植相比能有更多的婴儿出生。在我们的数据中，单囊胚移植的种植率、移植胚胎利用率明显高于双囊胚移植(75.4%VS58.1%;63.1%vs49.0%)，有文献[8]报道，ART中成熟卵子经受精后培养发育至囊胚着床直至胎儿出生，其利用率约为5.0%，在现有的条件下，提高移植胚胎的利用率不失为提高成熟卵子利用率的有效途径，囊胚移植到宫腔后，胚胎、宫腔、胚胎与内膜间的识别以及融合等因素都影响胚胎着床，当多枚胚胎移植到宫腔，因种种原因胚胎未能着床，则一次移植导致多枚胚胎的丢失，无疑会降低移植胚胎的利用率，此外，胚胎在宫腔内的竞争、胚胎发育过程中的自然减胎或医学需要的减胎以及流产等因素也会导致胚胎利用率降低，因此，由我们的数据可以看出，SET亦是提高胚胎利用率的有效途径之一。SET能有效避免双卵双胎的发生，但无法避免单卵双胎的发生。Kanter JR[9]回顾性分析了28596例鲜胚周期SET病例，结果显示移植单卵裂胚的双胎发生率为1.71% ，单囊胚移植的单卵双胎发生率为2.5%。在我们的数据中，单囊胚移植的单卵双胎发生率为2.0%，在双囊胚移植组中有4例为单卵双胎，发生率为2.2%(4/185)，整体的发生率与文献报道相近。

终上所述，优质囊胚冷冻复苏后SET能获得满意地临床妊娠率，同时能够有效降低多胎率，提高移植胚胎的利用率，若患者D5有≥3BB的优质囊胚，在复苏周期行单囊胚移植是可行的移植策略。

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TheApplicationofVitrifiedSingleHigh-QualityBlastocystTransfer

LIAO Hongqing,ZHOU Jun,ZHOU Jing,etal

(DepartmentofUrology,theSecondAffiliatedHospital，UniversityofSouthChina;Hengyang421001,China)

ObjectiveTo explore the clinical value of day 5 single high-quality frozen-thawed blastocyst transfer.MethodsRetrospectively analyze patients’ clinical documents on the first time treatment of high quality frozen-thawed blastocyst transfer in our hospital during Jan,2013 to Dec,2014.Compare the clinical pregnancy rate,implantation rate,multiple pregnancy rate and embryos utilization rate of the single blastocyst transfer group(n=65) and double blastocyst transfer group(n=240),which were divided based on the number of embryos.ResultsThere was no statistical difference between two groups on the clinical pregnancy rate (P>0.05).but the implantation rate of single blastocyst group was higher than double blastocyst group (P<0.01).The embryos utilization rate of single blastocyst group was higher than double blastocyst group (P<0.05).The multiple pregnancy rate of single blastocyst group was lower than double blastocyst group (P<0.01).ConclusionSingle high-quality frozen-thawed blastocyst transfer can ensure clinical pregnancy rate,reduce multiple pregnancy rate and improve the embryos utilization rate.It achieved better clinical result.

single frozen-thawed blastocyst transfer; clinical pregnancy rate; multiple pregnancy rate; embryos utilization rate

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.02.020

2015-09-12；

2016-01-15

*通讯作者，E-mail：yjzhoujun@163.com.

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