焦文娟，李飞强，张敏菁，史肖肖，朱木菲，毛存贵，祝增荣



灰飞虱鞘氨醇激酶时空表达分析及其对杀虫剂胁迫的响应

焦文娟1，李飞强1，张敏菁1，史肖肖1，朱木菲1，毛存贵2，祝增荣1

（1浙江大学昆虫科学研究所/水稻生物学国家重点实验室/农业部农业昆虫学重点实验室，中国杭州 310058；2Department of Medicine，Stony Brook University，Stony Brook，NY，USA）

【目的】明确灰飞虱（Fallén）鞘氨醇激酶（sphingosine kinase，SK）的分子特征，研究SK在携带水稻条纹病毒（，RSV）与健康灰飞虱两个种群的时空表达及其对杀虫剂胁迫的响应。【方法】利用PCR技术克隆灰飞虱SK（）基因序列；使用荧光定量PCR（qRT-PCR）技术分析在带毒种群与健康种群灰飞虱1—5龄若虫及成虫期的表达差异，并检测该基因在雌雄虫头、唾液腺、中肠、马氏管、卵巢和精巢等组织中相对表达量；采用手动微量点滴仪将3种杀虫剂（吡虫啉、噻嗪酮和溴氰菊酯）点滴于灰飞虱4龄若虫中胸背板，确定3种杀虫剂的半致死浓度（LC50）；根据半致死浓度的3种杀虫剂处理试虫后检测的表达动态；采用注射双链RNA（dsRNA）的方法沉默带毒种群和健康种群4龄若虫体内后，用半致死浓度的3种杀虫剂处理试虫并分析死亡率。【结果】克隆得到一段长度为1 282 bp的基因片段（GenBank登录号：KT989975）。氨基酸系统进化树显示LsSK与其他半翅目昆虫SK聚在同一支。LsSK氨基酸序列包含SK酶的4个保守区域C1—C4，其中SK激酶的活性位点——DAG活性区域位于C1—C3区域。qRT-PCR结果显示在带毒种群4龄若虫中表达量最高，3龄次之；健康种群5龄若虫表达量最高，1、4龄次之。且在带毒种群3、4龄表达量显著高于健康种群同时期若虫（＜0.05）；带毒成虫表达量显著高于健康成虫（＜0.05）。……