杨 芹, 陈海琴, 陈 思, 顾震南, 张 灏, 陈永泉, 陈 卫

江南大学食品学院, 江苏 无锡 214122



高山被孢霉ω-3脂肪酸脱饱和酶基因在麦胚无细胞蛋白质合成系统中的表达

杨 芹, 陈海琴*, 陈 思, 顾震南, 张 灏, 陈永泉, 陈 卫

江南大学食品学院, 江苏 无锡 214122

无细胞蛋白质合成系统具有快速、方便等特点，能表达对活细胞具有一定毒性的膜蛋白和抗菌肽，近年来被广泛应用。以来自产油丝状真菌高山被孢霉多不饱和脂肪酸合成途径中的关键膜结合酶——ω-3脂肪酸脱饱和酶为研究对象，构建了适宜体外表达ω-3脂肪酸脱饱和酶的表达载体pIVEX WG1.4-FADS15，并利用麦胚无细胞蛋白质合成系统实现了对该基因的高效表达。同时，通过在麦胚无细胞蛋白质合成过程中添加脂质体的方法，将所表达的膜蛋白正确定位至脂质体磷脂双分子层，以便目标蛋白质的正确折叠。研究结果显示，在此实验条件下目标蛋白质的表达量达1.8 mg/mL，经碘海醇密度梯度超速离心纯化后，该蛋白质的纯度可以达到90%以上。研究结果为后续对该酶进行催化特性研究和蛋白质晶体结构解析奠定了基础。

高山被孢霉；ω-3脂肪酸脱饱和酶；麦胚无细胞蛋白质合成系统；脂质体；蛋白纯化

在产油丝状真菌高山被孢霉(Mortierellaalpina)中，ω-3脂肪酸脱饱和酶是催化底物ω-6脂肪酸转化为ω-3脂肪酸的关键酶，高山被孢霉菌体中ω-6脂肪酸的含量可达到总脂的30%左右，而ω-3脂肪酸仅占总脂的3%[1]。因此，加大对ω-3脂肪酸脱饱和酶的研究是提高高山被孢霉中ω-3脂肪酸产量的必需途径。……