杨星星，毕思远，朱 海，顾大勇

(1.广东省深圳市易瑞生物技术有限公司，广东 深圳 518102；2.深圳市检验检疫科学研究院，广东 深圳 518045 )



滴滴涕单克隆抗体的制备及其评价

杨星星1，毕思远1，朱 海1，顾大勇2*

(1.广东省深圳市易瑞生物技术有限公司，广东 深圳 518102；2.深圳市检验检疫科学研究院，广东 深圳 518045 )

以滴滴涕(DDT)的特征部分为基础设计并合成了半抗原4-{4-[2,2,2-三氯-1-(4-氯-苯基)-乙基]-苯基}-丁酸(DDT-H1)、4-[4-(2,2,2-三氯-1-对甲苯基-乙基)-苯基]-丁酸(DDT-H2)，并采用活泼酯法制备免疫原 DDT-H1-BSA，以及混合酸酐法制备包被原DDT-H1-OVA、DDT-H2-OVA；用DDT-H1-BSA对小鼠进行免疫，通过细胞融合、筛选、克隆等步骤得到1株能稳定分泌DDT农药抗体的单克隆细胞株。细胞株经扩大培养后，注射小鼠体内产生腹水，并将其用辛酸-硫酸铵和protein A柱子纯化出单克隆抗体。其分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类为IgG1，单抗腹水的效价为1.68×105，亲和力Ka为5.238×1011L·mol-1，与其它几种代谢物有一定的交叉反应。在此基础上，利用获得的单抗研究建立DDT的间接竞争酶联免疫吸附检测法(icELISA)。结果表明，所建立的间接竞争 ELISA 方法的线性范围(IC20～IC80)为 6.6～521.8 ng/mL，可用于检测农副产品、环境中残留的DDT及其代谢物。

滴滴涕；单克隆抗体；酶联免疫检测；代谢物

有机氯农药滴滴涕(DDT)作为广谱杀虫剂从20世纪50年代开始在全世界范围内广泛使用。这一类含氯原子的有机合成杀虫剂，具有极高的脂溶性和稳定性，可在生物体内富集很高的浓度，且在环境中降解缓慢,其活性成分为p,p′-DDT，属持久性有机污染物(POPs)[1-2]。DDT在沉积物中的两种主要分解物为2，2-双(4-氯苯基)-1，1-二氯乙烯(DDE)和2，2-双(4-氯苯基)-1，1-二氯乙烷(DDD)，而DDD 本身也用作杀虫剂。……