刘宝欣， 刘英宇，魏中秋， 梁婷婷，范玉磊，杨 方，孙 影△

(1.华北理工大学附属唐山市工人医院呼吸内科，河北唐山 063000；2.华北理工大学基础医学院病理学系，河北唐山 063000)



·技术与方法·

Peroxiredoxin-1基因沉默对转化生长因子β1促进肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响*

刘宝欣1， 刘英宇1，魏中秋2， 梁婷婷2，范玉磊2，杨 方2，孙 影2△

(1.华北理工大学附属唐山市工人医院呼吸内科，河北唐山 063000；2.华北理工大学基础医学院病理学系，河北唐山 063000)

目的 探讨Peroxiredoxin-1(Prx-1)基因沉默对转化生长因子β1(TGF-β1)促进肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原的影响及其作用机制。方法 体外培养肺成纤维细胞分为4组：对照组(0.4%血清)，TGF-β1组(5μg/L)，TGF-β1+阴性转染组(5μg/L TGF-β1+阴性对照siRNA)，TGF-β1+Prx-1siRNA转染组(5μg/L TGF-β1+Prx-1siRNA)。利用脂质体Lipo2000将阴性对照siRNA和Prx-1siRNA分别转染到TGF-β1+阴性转染组和TGF-β1+ Prx-1siRNA转染组的肺成纤维细胞中，转染48h后用于后续实验。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染后各组的Prx-1mRNA表达水平，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Akt(p-Akt)及Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白水平，2,7-二氯荧光素二乙酸检测活性氧(ROS)水平。结果 (1) Prx-1siRNA转染肺成纤维细胞后，TGF-β1+ Prx-1siRNA转染组的Prx-1mRNA表达明显降低。(2) 与对照组比较，TGF-β1组Ⅰ和Ⅲ 型胶原、ROS及p-Akt蛋白水平均明显增加(0.34±0.06vs. 0.58±0.06、0.42±0.05vs. 0.56±0.06、2988±379vs. 4315±580和0.29±0.05vs. 0.66±0.07，差异有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β1组比较，TGF-β1+阴性转染组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及p-Akt水平无明显变化(P>0.05)，但TGF-β1+Prx-1siRNA转染组Ⅰ和Ⅲ 型胶原、ROS及p-Akt蛋白水平均进一步增高(0.58±0.06vs. 0.79±0.09、0.56±0.06vs. 0.77±0.08、4315±580vs. 5841±782和0.66±0.07vs. 0.93±0.15，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS，并由此促进Akt的激活和肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原；而沉默Prx-1基因可激活ROS/Akt通路，从而有助于TGF-β1促进肺成纤维细胞合成胶原。

活性氧；转化生长因子-β1；胶原；Peroxiredoxin-1

矽肺是长期吸入二氧化硅粉尘而引起的一种职业病，其主要病理变化是肺组织弥漫性纤维化，Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达增多是其中重要原因之一[1]。转化生长因子β1(transforming growth factro-β1，TGF-β1)在矽肺肺组织中表达增高，具有促纤维化作用。笔者前期研究显示，TGF-β1可通过上调活性氧(reactive oxygen specie，ROS)激活C-Jun蛋白激酶(JNK)细胞内信号传导通路，从而促进肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原[2-3]。……