蔡小艳，李 胜，陈秋萍，王 萍，邓 凯，刘庆友* ，石德顺*

(1.广西大学，亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530004； 2.广西壮族自治区畜牧研究所，南宁 530001)



水牛bbu-miR-103-1在泌乳期与非泌乳期表达模式及靶向基因的初步研究

蔡小艳1，2，李 胜1，陈秋萍1，王 萍1，邓 凯1，刘庆友1*，石德顺1*

(1.广西大学，亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530004； 2.广西壮族自治区畜牧研究所，南宁 530001)

旨在探讨bbu-miR-103-1在水牛泌乳期和非泌乳期的差异表达模式，并预测其靶向调控基因及功能。本研究应用qRT-PCR检测bbu-miR-103-1，在水牛泌乳期和非泌乳期的差异表达。构建bbu-miR-103-1前体表达质粒LpEZX-pre-miR-103-1,并在293T细胞中包装高滴度的慢病毒颗粒，用于感染水牛乳腺上皮细胞实现过表达bbu-miR-103-1，同时应用化学合成的bbu-miR-103-1抑制剂转染水牛上皮细胞实现抑制表达bbu-miR-103-1，研究bbu-miR-103-1对PANK3及乳脂代谢相关基因表达的影响。结果表明，水牛泌乳期bbu-miR-103-1的相对表达量为非泌乳期的5.29倍(P<0.01)；成功构建的慢病毒载体LpEZX-pre-miR-103-1包装获得了感染滴度为3.47×106PFU·mL-1的慢病毒颗粒；过表达和抑制表达bbu-miR-103-1分别极显著下调和上调了水牛乳腺上皮细胞PANK3基因的相对表达量(P<0.01)；过表达bbu-miR-103-1极显著提高了ACACA、GPAM、DGAT1和PDK4基因的表达(P<0.01)，对SREBP1c、ADFP、CD36、ACSS1等基因产生了显著的上调作用(P<0.05)。过表达bbu-miR-103-1通过下调PANK3的表达，反馈提高了SREBP1c的mRNA水平，促进了以ACACA开头的脂肪酸从头合成。表明bbu-miR-103-1对水牛乳脂肪合成有十分重要的促进作用，为揭示水牛高乳脂形成和调控机理提供了分子依据。

水牛；bbu-miR-103-1；表达模式；PANK3

小的非编码RNA分子miRNA，大小为18～25 nt个核苷酸，由生物体自身的基因转录而成，在转录后和转录前水平上参与基因表达的调控[1-3]。据估算，miRNA可能对所有哺乳动物的2%～5%的基因负责，调节多达60%的蛋白编码基因[4]。miRNA通过与靶mRNA的碱基互补配对，使靶mRNA降解或者沉默从而起到调控基因表达的作用。miRNA在细胞增殖、分化和凋亡等发育和特殊生物过程中发挥关键作用[5]。在乳腺细胞中已经鉴定出miRNA[6-7]，乳腺细胞有自己专有的miRNAs，在小鼠和人类乳腺组织都发现特别的miRNAome表达型，人类乳腺特异信号以23miR为主要特征，而小鼠的特异信号是以miR-let-7a等9个miR为主要特征[8]。……