吴 桐 徐文峰 年四季 叶迎春 袁 青

(四川医科大学基础医学院，泸州646000)



金黄色葡萄球菌α-溶血素的克隆及可溶性融合表达①

吴 桐 徐文峰 年四季 叶迎春 袁 青

(四川医科大学基础医学院，泸州646000)

目的：表达纯化可溶性金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-HL)作为抗原，用以后期制备全人源抗α-HL抗体，为金黄色葡萄球菌感染提供新的治疗手段。方法：提取金黄色葡萄球菌总RNA，经反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，扩增α-HL cDNA，将cDNA双酶切后与载体pCold-TF连接，转化E.coli TOPO 10，菌落PCR及测序验证插入基因的正确性。将测序正确的α-HL/pCold-TF重组质粒转化E.coli BL21进行低温诱导表达，SDS-PAGE和Western blot验证表达产物的正确性。结果：PCR扩增得到的α-HL基因大小为900 bp左右；将重组质粒α-HL/pCold-TF转化E.coli BL21，经15℃低温诱导表达24 h ，诱导得到可溶性的α-HL融合蛋白，融合蛋白大小为90 kD左右(载体上的TF 分子伴侣大小为45 kD左右)；经Western blot 验证表达纯化的蛋白为α-HL融合蛋白。将纯化的α-HL蛋白注射BABL/c小鼠制备抗血清，结果显示抗血清与金黄色葡萄球菌结合良好，效价大于10 000倍。结论：成功对α-HL进行了基因克隆，并成功表达纯化到可溶性的α-HL融合蛋白。

金黄色葡萄球菌；α-HL；可溶性表达

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人类感染性疾病的重要病原体，特别容易引发肺炎、皮肤脓肿和菌血症，感染后具有很高的死亡率。抗生素是治疗金黄色葡萄球菌感染的主要手段，长期以来是有效的。随着近年世界范围内的抗生素滥用越来越严重，金黄色葡萄球菌出现了对几乎所有抗生素耐药的菌株--耐甲氧西林金葡菌MRSA。MRSA几乎对所有β-内酰胺类抗菌药物耐药，甚至累及到红霉素、环丙沙星和庆大霉素。……