雷良玉 胡 燕 郭萌萌 卢 佳 郑 文 徐华林 陈 超 徐 林

(贵州省遵义医学院免疫学教研室，遵义563000)



·基础免疫学·

miRNA-126基因敲减小鼠脾脏中免疫细胞的组成变化①

雷良玉 胡 燕 郭萌萌 卢 佳 郑 文 徐华林 陈 超 徐 林

(贵州省遵义医学院免疫学教研室，遵义563000)

目的：观察miRNA-126基因敲减(Knock down，KD)小鼠脾脏中免疫细胞组成比例变化并探讨其意义。方法：Realtime PCR探针法检测miR-126KD小鼠脾脏中miR-126表达水平，计算脾脏总细胞数；HE染色观察脾脏组织的病理学变化；流式细胞术(FACS)分别检测脾脏中DCs细胞、巨噬细胞、γδT细胞、NKT细胞，CD3+T细胞和其亚群以及CD19+B细胞的比例并计算细胞绝对数；免疫印迹法(Western blot,WB)检测脾脏组织中磷酸化NF-κB和磷酸化Akt的表达水平。结果：与野生型(WT)小鼠相比，miR-126KD脾组织中miR-126表达水平明显降低(P<0.05)，细胞总数明显增加(P<0.05)，且发生明显病理学改变；固有免疫细胞中NK细胞的比例和细胞绝对数显著增加(P<0.05)，但巨噬细胞的比例显著降低(P<0.05)；适应性免疫细胞中CD3+T细胞和CD4+T细胞的比例和绝对细胞数都显著增加(P<0.05)，而CD19+B细胞仅绝对数显著增加(P<0.05)；最后miRNA-126KD小鼠脾脏组织的磷酸化NF-κB和磷酸化Akt水平明显增加(P<0.05)。结论：miRNA-126敲减小鼠脾脏中各免疫细胞亚群的组成发生明显改变，可能与NF-κB和Akt信号通路传递变化有关，为后续探讨miR-126在机体免疫应答中的作用提供了前期实验基础。

miRNA-126；基因敲减；免疫细胞；组成

脾脏(Spleen，Sp)是哺乳动物最大的外周免疫器官，是免疫应答的重要部位。脾脏中含有丰富的T细胞、B细胞、树突细胞(DC)及巨噬细胞、NK细胞等细胞亚群，它们的组成比例和数量的维持对于机体免疫应答功能的发挥至关重要，且与多种临床疾病的发生密切相关[1-3]。微小RNAs(microRNAs,miRNAs)广泛存在于多种生命体中，并在机体多种组织器官的发育及功能中具有关键的调控作用。MicroRNA-126(miR-126)是miRNAs 家族中重要的一员，位于人表皮生长因子样结构域蛋白7(Human epidermal growth factor like domain protein multiple 7,EGFL7)基因7号内含子中，其在血管和心脏、肺等组织器官的内皮细胞中高表达，并参与组织细胞的发育和功能调控过程[4,5]。新近研究报道miR-126也参与了机体多种免疫细胞的发育和功能的调控[6,7]。我们新近发现miRNA-126参与维持小鼠肠系膜淋巴结中T淋巴细胞的组成比例[8,9]，然而其是否也参与脾脏中各固有免疫细胞和适应性免疫细胞组成比例的维持，以及相关分子机制仍未有研究探讨。……