田卫花，马文媛，李莎莎

(1.甘肃省中医药研究院，甘肃兰州 730050；2.甘肃省中医院检验科，甘肃兰州 730050)



·论 著·

抗CCP抗体、AKA及APF联合检测在类风湿关节炎诊断中的应用价值

田卫花1，2，马文媛2，李莎莎2

(1.甘肃省中医药研究院，甘肃兰州 730050；2.甘肃省中医院检验科，甘肃兰州 730050)

目的 观察抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、抗角蛋白抗体(AKA)及核周因子(APF)对类风湿性关节炎(RA)的诊断价值。方法 选择RA患者110例(RA组)、其他自身免疫性疾病患者50例(非RA组)和健康体检者110例(对照组)为研究对象，采用间接免疫荧光法检测AKA、APF，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗CCP抗体。结果 RA组患者3项检测指标阳性率均明显高于非RA组和对照组，差异均有统计学意义(P<0．05)；3项目串联试验的灵敏度和特异性分别为44.55%、99.38%，3项目并联试验的灵敏度和特异性分别为93.64%、85.63%。结论 在RA的诊断中抗CCP抗体具有较高的特异性和灵敏度，3项目串联试验可以提高特异性，降低误诊率，3项目并联试验可以提高灵敏度，降低漏诊率，3项目联合检测指导临床对RA的诊断具有重要价值。

关节炎,类风湿/诊断; 自身抗体/诊断应用； 角蛋白质类/免疫学; 抗体/血液； 核周因子

类风湿关节炎(RA)是一种以关节损伤为主的慢性全身性自身免疫性疾病。RA致残率高，如不能早期诊断、合理治疗，3年内关节破坏可达90%，进而造成永久性的关节畸形[1-2]。2010年美国风湿病学会(ACR)联合欧洲抗风湿病联盟(EULAR)发表了新的类风湿关节炎分类标准，引入了抗瓜氨酸蛋白抗体(ACPA)作为新的诊断标准之一[3]。经典的类风湿因子(RF)特异性较差，且符合该标准的患者常已出现骨关节破坏，不利于早期诊治[4-5]。而对ACR 新的诊断标准在国内使用也需要进一步的验证[5]。本研究选择了抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、抗角蛋白抗体(AKA)及核周因子(APF)3个与RA相关的检测指标进行对比分析，以明确其在临床诊断中的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 RA组 选择2012年10月至2014年3月甘肃省中医院风湿骨病科住院的RA患者110例，其中男40例，女70例；年龄25～70岁，均符合ACR 1987年修订的RA诊断标准，无严重肾损伤、甲状腺、甲状旁腺等疾病。

1.1.2 非RA组 选择2012年10月至2014年3月甘肃省中医院住院及门诊就诊的其他自身免疫性疾病患者50例，其中男12例，女38例；年龄25～75岁；关节炎患者33例，系统性红斑狼疮(SLE)2例，原发性干燥综合征(Pss)15例。均有关节疼痛的临床表现，诊断均符合相应的国际诊断标准。

1.1.3 对照组 选择同期在甘肃省中医院进行健康体检的健康者110例，均排除各种自身免疫性疾病。

1.2 仪器与试剂 抗CCP抗体、AKA与APF试剂盒均为北京和杰创新公司产品，均提供质控血清。仪器为芬兰雷勃MK2洗板机、雷杜RT-6100 酶标分析仪和奥林帕斯BX43荧光显微镜等。

1.3 实验方法 采集研究对象早晨空腹静脉血3～5 mL，离心后的血清标本储存于-70 ℃冰箱待测。

1.3.1 ELISA方法检测抗CCP抗体 按试剂盒操作说明书将患者血清进行1∶50稀释，依次加入A～E标准品、阴性对照、阳性对照、稀释后患者血清，均做2个复孔。抗CCP抗体大于25 U/mL定义为阳性。

1.3.2 间接免疫荧光法(IIF)检测AKA和APF 按试剂盒操作说明书将血清进行1∶10稀释并按试剂盒操作说明书加至反应孔上，设阴、阳性对照。封片后荧光显微镜下观察结果。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计数资料以率或构成比表示，采用四格表χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。灵敏度=检测阳性例数/真阳性例数；特异性=检测阴性例数/真阴性例数；阳性预测值=检测真阳性例数/所有检测阳性例数；阴性预测值=检测真阴性例数/所有检测阴性例数[2，6-8]。RA组患者全部符合ACR 1987年修订的RA诊断标准，临床确诊为RA，该组检测的阳性结果属于检测真阳性；非RA组、对照组已被临床排除RA的可能，该两组检测的阴性结果属于检测真阴性。

2 结 果

2.1 AKA及APF检测结果 AKA检测阳性表现为大鼠食道角质层有多条连续的板层状或非连续的点片状荧光，见图1。APF检测阳性表现为颊黏膜细胞核周围出现圆形、均质的绿色荧光颗粒，且在同一反应孔中观察到5个以上可判断为阳性，见图2。

图1 AKA检测阳性

图2 APF检测阳性

2.2 各组研究对象抗CCP抗体、AKA及APF阳性率比较 RA组患者抗CCP抗体、AKA、APF阳性率明显高于非RA组及对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.3 3种检测项目单项检测的效能比较 3种检测项目在RA诊断中的筛选能力见表2。AKA的灵敏度明显低于抗CCP抗体和APF，特异性高于二者。

表1 各组研究对象抗CCP抗体、AKA及APF阳性率比较[n(%)]

*：P<0.05，与RA组比较。

表2 抗CCP、AKA及APF单项检测的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值(%)

2.4 RA组患者抗CCP抗体与AKA、APF检测结果比较 RA组患者抗CCP抗体与AKA抗体检测结果比较差异有统计学意义(χ2=8.562，P<0.05)，与APF抗体检测结果比较差异无统计学意义(χ2=1.447，P>0.05)。

表3 RA组患者AKA、APF与抗CCP抗体检测结果比较

2.5 3种特异性抗体串、并联试验的灵敏度和特异性比较 同时检测抗CCP抗体、AKA和APF，3项目串联试验的特异性进一步提高，但灵敏度下降；而3项目并联试验的灵敏度提高，但特异性下降。见表5。

表5 3种特异性抗体串、并联试验的灵敏度和特异性比较(n=270)

3 讨 论

RA是一种以周围关节受损为主的慢性自身免疫性疾病，是最常见的炎性关节疾病之一。RA的特征表现为对称性、慢性、进行性多关节炎并伴有全身多系统受累[9]。长期以来，RF是诊断RA的唯一血清学指标，但其存在灵敏度高但特异性差的缺点。例如在某些干燥综合征、结缔组织病等其他免疫性疾病患者的血清中也会出现RF的升高，这就难以避免出现假阳性情况；况且很多早期RA患者体内并不出现RF的升高，因此也会出现漏诊[8]。

近年来相继发现了一些在诊断RA中较为特异的抗体如抗CCP抗体、AKA、APF、抗Sa抗体等，后来发现AKA、抗CCP抗体和APF这3种自身抗体在化学结构上具有一定的关联性。APF、AKA和抗CCP抗体的靶抗原是上皮细胞分化终末阶段的细胞骨架成分丝聚蛋白(Filaggrin)，而瓜氨酸是Filaggrin 的组成成分，称为瓜氨酸相关的自身免疫系统[10-11]。大部分文献报道诊断RA，抗CCP 抗体比RF 具有更高的特异性，较好的灵敏度，具有早期诊断价值[11-12]。2010年ACR和EULAR重新修订的诊断标准中将抗CCP 抗体纳入血清学诊断标准[3，11]。本研究结果显示，抗CCP抗体诊断RA的灵敏度和特异性分别为83．64%和88.00%，与国内相关报道较为一致。

AKA是由Young等[13]于1979年采用IIF，以Wistar大鼠食管中1/3段上皮为底物，首先在RA患者的血清中检测到的，发现其对RA具有高度特异性。本研究发现AKA灵敏度相对较低，但单项检测其特异性最高，达94.00%。APF抗体靶抗原存在于人颊黏膜角质透明颗粒中，1995年有学者从人颊黏膜细胞中提取该抗原，APF与角蛋白丝聚集原或Filaggrin前体的单克隆抗体可显现相同的条带[14]，故作为RA诊断指标之一。

本研究发现，RA组患者抗CCP抗体、AKA、APF阳性率明显高于非RA组及对照组，差异均有统计学意义(P<0．05)。抗CCP抗体单项检测在RA组阳性率为83.64%，在非RA组仅为12.00%，说明抗CCP抗体这个检测指标可以用来鉴别RA和其他相关自身免疫性疾病[8]，AKA的灵敏度为48.18%，明显低于抗CCP抗体(83.64%)和APF(57.27%)；AKA的特异性为94.00%，高于APF(90.00%)和抗CCP抗体(88.00%)。3项目串联试验可提高检测特异性，高达99.38%，从而降低误诊率；3项指标并联试验可提高检测灵敏度，达93.64%，降低了漏诊率。

综上所述，抗CCP抗体对RA的诊断具有较高的灵敏度、特异性和临床应用价值，AKA与APF是RA诊断较理想的补充项目。抗CCP抗体、AKA、APF联合检测能够提供更加丰富的诊断信息，可显著提高RA诊断的准确性，降低漏诊率和误诊率。

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Combined detection of anti CCP antibodies,AKA and APF in the diagnosis of rheumatoid arthritis*

TianWeihua1，2，MaWenyuan2，LiShasha2

(1.TraditionalChineseMedicineInstituteofGansuProvince，Lanzhou，Gansu730050，China; 2.GansuProvincialTCMHospital，Lanzhou,Gansu730050，China)

Objective To investigate the diagnostic value for rheumatoid arthritis(RA) by using combined detection of anti-cyclic citrullinated peptide antibody(anti CCP)，anti keratin antibody(AKA) and the antiperinuclear factor (APF) in serum．Methods A total of 110 RA patients(RA group)，50 patients with other autoimmune diseases(non RA group) and 110 healthy subjects (control group) were enrolled in the study．The concentrations of AKA,APF were detected by using indirect immunofluorescence assay and anti CCP by using ELISA．Results The positive rates of anti-CCP，AKA，APF in RA group were higher than those in non RA group and control group(P<0．05).In the series detection of the three indicators，the sensibility and specificity were 44.55% and 99.38% respectively;in the parallel detection of the three indicators the sensibility and specificity were 93.64% and 85.63% respectively.Conclusion Anti CCP detection exhibits relatively higher sensitivity and specificity in the diagnosis of RA.Series detection of the 3 indicators can improve the specificity,reduce the rate of misdiagnosis;parallel detection of the 3 indicators can improve the sensitivity,reduce the rate of misdiagnosis.The Combined detection of anti CCP，AKA and APF has better diagnostic efficiency than single detection.

arthritis,rheumatoid/diagnosis； autoantibodies/diagnostic use； keratins/immunology； antibodies/blood； antiperinuclear factor

甘肃省卫生行业科研计划管理资助项目(GWGL2013-1)。 作者简介：田卫花，女，主管检验师，主要从事自身抗体检测和肿瘤免疫的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.003

A

1673-4130(2016)02-0150-03

2015-08-22)