杨 怿，李玉蕾，刘 梦，周培岚，苏瑞斌，宫泽辉

（军事医学科学院毒物药物研究所，抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京100850）

·实验方法·

稳定表达人源α2A-肾上腺素受体细胞系的建立

杨 怿，李玉蕾，刘 梦，周培岚，苏瑞斌，宫泽辉

（军事医学科学院毒物药物研究所，抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京100850）

目的建立稳定表达人源α2A-肾上腺素能受体（α2A-AR）的细胞系。方法将带有潮霉素B（Hygro）抗性的α2A-AR（pcDNA3.1/Hygro-HA-α2A-AR）重组质粒通过脂质体介导转染至已表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的蛋白激酶A催化亚基（PKAcat）的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞（以Hygro 200 mg·L-1进行压力筛选后，采用PKA重分布实验筛选阳性克隆），然后使用实时定量PCR验证α2A-AR受体在转录水平的表达，最后以时间分辨荧光共振能量转移免疫实验检测cAMP含量以鉴定受体功能。结果PKA重分布实验结果表明，CHO-PKAcat-α2A-AR 7号克隆反应性良好；与CHO-PKAcat-EGFP细胞相比，该细胞系α2A-AR mRNA表达水平较高（P＜0.01），且多次传代能保持稳定；在α2A-AR激动剂作用后，能显著抑制forskolin引起的cAMP水平升高（P＜0.01）。结论成功构建稳定表达α2A-AR的CHO-PKAcat-α2A-AR细胞系，可用于药物筛选及机制研究。

中国仓鼠卵巢细胞；受体，肾上腺素α2A；蛋白激酶A；cAMP

位于交感神经节前和节后的α-肾上腺素受体（α-adrenoceptor，α-AR）对一系列激动剂或拮抗剂表现不同效应，其分型包括α1-AR和α2-AR。α2-AR主要分布于突触前，在中枢和外周神经系统的肾上腺素和非肾上腺素能神经元上反馈调节递质释放［1］，进而介导多种生理或药理作用。基因测序又将α2-AR分为3个亚型，分别位于10，2和4号染色体上，依次命名为α2A-AR，α2B-AR和α2C-AR［2］。目前已逐渐……