吕建敏, 陈方明，陈诚

(浙江中医药大学动物实验研究中心，杭州 310053)



基于OPG/RANK/RANKL系统比较研究前肢畸形WHBE兔骨代谢特征

吕建敏, 陈方明，陈诚

(浙江中医药大学动物实验研究中心，杭州 310053)

目的 利用OPG (osteoprotegerin)/RANK (receptor activator of NF-κB)/RANKL (receptor activator of NF-κB ligand)系统比较研究前肢畸形WHBE兔骨代谢特征。方法 取WHBE兔、日本大耳白兔、前肢畸型WHBE兔各10只，分为3组，标记为HWR (healthy WHBE rabbit)、HJR (healthy Japanese rabbit)和FMWR (forelimb malformation WHBE rabbit)组。用X射线机所拍摄X-线片观察各组兔前肢尺桡部形状并测定平均灰度值；通过骨组织石蜡切片HE染色对前肢骨组织进行微观形态分析；采用荧光定量PCR法检测OPG、RANKL基因在肝脏中表达；采用酶联免疫法和免疫组化法分别测定OPG/RANK/RANKL蛋白在血清和骨组织中的表达。结果 与HWR和HJR组比较，FMWR组兔前肢尺桡部呈异常弯曲状，骨皮质明显变薄，X-线片所示灰度值显著低于HWR组(P<0.05)。FMWR组兔在肝脏RANKL基因表达水平和RANKL/OPG mRNA比值(P<0.01)，血清RANK、RANKL蛋白含量及RANKL/OPG比值(P<0.05,P<0.01)，骨组织RANKL蛋白表达阳性指数及RANKL/OPG比值(P<0.05,P<0.01)等指标上均显著高于HWR组和HJR组。与HJR组比较，HWR组兔肝脏OPG和RANKL基因表达水平显著提高(P<0.05,P<0.01)。结论 前肢畸形WHBE兔存在骨质量下降、骨组织受损现象，RANKL/OPG比值明显升高，骨代谢紊乱是其骨骼发生畸形的主要原因。与日本大耳白兔在RANKL基因表达水平上的品种差异可能是WHBE兔对前肢畸形易感的诱因。

WHBE兔；日本大耳白兔；前肢畸形；骨代谢；OPG/RANK/RANKL系统

白毛黑眼兔(WHBE rabbit)是浙江省的一种特色实验动物[1]，在育种过程中，研究人员发现WHBE兔容易发生自发性前肢畸形疾病，且发生率要高于其他品种兔。已有研究表明,WHBE兔对骨骼畸形疾病敏感性可能与其血清中Ca和ALP水平较低有关[2]，但具体原因尚不明确。另一方面，骨骼畸形是骨代谢异常的表现，osteoprotegerin (OPG)/receptor activator of NF-κB (RANK)/ receptor activator of NF-κB ligand (RANKL)系统是近年发现的调节骨代谢的重要通路[3]，目前已作为主要的标志物广泛用于骨代谢的研究[4-8]。本研究首先从骨骼形状和骨组织微观形态观察上验证前肢畸形WHBE兔与 兔的差异性，再从OPG/RANK/RANKL系统入手，从基因和蛋白表达层面比较研究前肢畸形WHBE兔、 WHBE兔和 日本大耳白兔三者在OPG、RANK、RANKL表达特性上差异，为探讨前肢畸形WHBE兔致畸原因，揭示WHBE兔骨代谢特征提供参考。……