朱雪龙，黄　兵,3，韩红玉，赵其平，朱顺海，李　聪，门启斐,2，王自文，夏伟丽,2，董　辉

（1. 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241；2. 上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234；3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州225009）

柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达

朱雪龙1，黄兵1,3，韩红玉1，赵其平1，朱顺海1，李聪1，门启斐1,2，王自文1，夏伟丽1,2，董辉1

（1. 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241；2. 上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234；3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州225009）

为了构建柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Eimeria tenella serine/threonine protein kinase，EtSTK）基因的真核表达重组质粒，并实现在DF-1细胞中的表达，以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板，PCR扩增EtSTK基因，将扩展产物与真核表达质粒pcDNA3.1-flag连接，构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-flag-EtSTK，测序鉴定正确后，转染DF-1细胞进行表达，利用Western blot和间接免疫荧光（indirect immunofl uorescene assay，IFA）对其表达情况进行鉴定。结果表明重组质粒pcDNA3.1-flag-EtSTK构建成功。Western blot显示在54 kDa处出现条带；IFA检测到特异性的绿色荧光，表明构建的重组质粒pcDNA3.1-fl ag-EtSTK成功地在DF-1中实现了表达。本研究结果为深入了解柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的功能及球虫核酸疫苗提供了基础。

柔嫩艾美耳球虫；丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶；DF-1细胞；真核表达

鸡球虫病是一种全球性的原虫病，在集约化养殖场中的发病率高达50%～70%，死亡率为20%～30%，严重时甚至可达80%，每年给全球养禽业造成的直接经济损失高达5亿英镑[1]。……