崔宏锐，滕巧泱，石　迎，陈鸿军，李雪松，刘芹防，李泽君

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

利用反向遗传技术构建表达绿色荧光蛋白的H9N2禽流感重组病毒

崔宏锐，滕巧泱，石迎，陈鸿军，李雪松，刘芹防，李泽君

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

H9N2 亚型禽流感病毒普遍存在于我国大部分地区，宿主范围较广，是世界卫生组织发布的最具大流行潜力的病毒之一。为了利用H9N2亚型禽流感病毒表达绿色荧光蛋白（green fl uorescent protein，GFP），通过反向遗传操作技术将A/Chicken/ Shanghai/2093/2009（H9N2）（SH2093）毒株的NS2基因连接到PB1基因下游，同时将GFP基因连接在NS1基因之后，拯救并获得了 1 株表达GFP的重组病毒SH2093-GFP。虽然SH2093-GFP 在MDCK细胞上的增殖能力低于野生毒株 SH2093，但该病毒可以成功表达GFP，为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒作为外源基因表达载体等提供重要依据。

禽流感病毒；H9N2 亚型；反向遗传操作；基因重组病毒

自1994年我国首次报道从鸡群分离到H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）以来，该亚型流感病毒开始广泛存在于辽宁省、安徽省、山东省、广东省、福建省、江苏省、河南省、湖南省、上海市、广西壮族自治区、云南省、四川省等全国大部分地区[1-3]，成为危害我国养殖业的最主要的低致病性禽流感病毒[4]。目前，H9N2亚型禽流感病毒感染禽类后还没有出现大批死亡的现象，但可导致禽类产蛋量下降，出现免疫抑制病，并可与其他病原体共同感染从而导致高死亡率。同时H9N2亚型AIV传播能力特别强，存在范围极其广泛，该病毒还可感染猪[2]和人[5,6]。有研究表明，2013～2014年间多次爆发于我国内地多个省市，造成人感染和死亡的H7N9亚型AIV中，有6个内部基因源于H9N2亚型AIV[7,8]。……