江国荣　禤雪梅　潘雪莲　刘少文　何玲玲（.佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）药剂科佛山58000；.佛山市中医院药剂科佛山58000）

不同炮制方法对中药延胡索中有效成分含量的影响

江国荣1禤雪梅1潘雪莲1刘少文2何玲玲2（1.佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）药剂科佛山528000；2.佛山市中医院药剂科佛山528000）

目的：比较醋炙、醋煮、酒炙、醋烘等炮制方法对延胡索中有效成分含量的影响。方法：将延胡索生品分别经醋炙、醋煮、醋烘、酒炙后，以水超声法对不同炮制品提取，高效液相色谱法测定去氢紫堇碱、延胡索乙素成分的含量，乙腈：0.1％磷酸溶液=72∶28作为试验的流动相，色谱柱AgilentC18色谱柱，柱温为室温，检测波长为282nm。结果：延胡索经不同炮制后生物碱去氢紫堇碱含量均有所升高，醋烘、醋炙、酒炙延胡索中延胡索乙素的含量有所上升，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：高效液相色谱法测定中药延胡索不同炮制品中的2种有效成分，操作步骤简单、重复性好，根据药材的治疗需要，采用醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法可以增加延胡索有效成分的含量。

延胡索 去氢紫堇碱 延胡索乙素 不同炮制 高效液相色谱法

延胡索（Corydalis Rhizoma）为多年生罂粟科草本植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥块茎[1]，因有活血、止痛、利气的功效，临床上多用于治疗脘腹疼痛、经闭痛经、产后瘀阻[2]。生物碱是中药延胡索中的主要有效成分，其中药材中含有的大部分为结合态的生物碱，只有碱性较弱的成分以游离态的形式存在[3]。延胡索多以炮制后入药治疗疾病，醋煮、醋烘、醋炙、酒炙均为2015年版《中国药典（一部）》收载的炮制延胡索饮片经典方法[4]，但是国内文献中对于不同炮制方法对延胡索的有效成分研究报道较少[5]，因此，本文采用了高效液相色谱法（HPLC），以延胡索主要的有效成分去氢紫堇碱、延胡索乙素为参考指标，探讨上述四种炮制方法对延胡索有效成分含量的影响，以期为优化延胡索炮制工艺提供参考，实验研究步骤如下。

1　实验材料

1.1实验仪器：日本岛津1100高效液相色谱仪（主要包括紫外检测系统、色谱工作站），电子分析天平（美国梅特勒天平公司，精密度0.0001g），CO2真空干燥箱（北京实验仪器公司），超声提取仪器（上海生物科技有限公司）。

1.2实验药材与实验试剂：延胡索生品药材购于本市中药材公司（批号为120825）；延胡索乙素对照品（批号：20120323）、去氢紫堇碱对照品（批号：20120620）均购于中国食品药品生物制品检定所；陈醋选择山西老陈醋，黄酒为即墨市生产，乙腈、甲醇溶液均为色谱纯，水为三蒸水。

2　方法与结果

2.1延胡索不同炮制品炮制方法

2.1.1醋炙延胡索：将从中药材公司购买的同一批号的延胡索生品洗净，晾干，20％的陈醋作为浸泡剂将生品浸泡，醋液被药材完全吸尽后，生品文火上炒干。

2.1.2醋煮延胡索：20％陈醋将延胡索生品浸润，浸润时间以醋液被生品完全吸尽为准，后武火将浸润完成后的药材药液煮沸后，文火将溶液蒸煮，醋液吸收完全后置于CO2烘箱中进行干燥。

2.1.3醋烘延胡索：延胡索生品适量，称重后20％的陈醋进行浸润，待药材中的醋液被药材吸尽后，置设定温度为120℃的CO2烘箱中，烘烤40min，取出后在室温下晾干。

2.1.4酒炙延胡索：中药延胡索生品适量，20％的黄酒浸润待浸泡溶剂吸收完全后，文火将浸润生品炒干。

2.2色谱条件的选择：AgilentC18（250mm×4.6mm，2.5μm）为实验过程中的色谱柱，乙腈：0.1％磷酸溶液（三乙胺调节pH为5.2～5.4）=72∶28为流动相，柱温为室温，检测波长为282nm，进样量为10μL，流速为1.0mL/min。延胡索乙素、去氢紫堇碱有较好的分离，按照延胡索乙素色谱峰进行计算理论塔板数>3000。见图1、图2。

2.3供试品溶液的配制：取中药延胡索生品及不同炮制品，精密称定后粉碎机打成细粉，分别过40目筛后置于带瓶塞的三角锥形瓶中，150mL水溶液定量，超声30min，后静置到室温后将上层溶液滤过，按照上述步骤重复操作2次，合并3次超声滤液后蒸干，残渣加入50mL水溶解后加入浓氨水10mL，乙醚溶液作为萃取剂连续萃取3次，每次30mL，合并3次萃取液后置于烧杯中，水浴锅上蒸干，蒸干后的浓缩品适量，精密称定，置于5mL容量瓶中，甲醇溶液溶解后定溶至刻度，得供试品溶液。

2.4对照品溶液的制备：称取延胡索乙素、去氢紫堇碱对照品适量，精密称定，置于10mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度，即得对照品溶液。

2.5线性关系考察：精密吸取延胡索乙素、去氢紫堇碱对照品0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0mL置于2mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度，按照“2.2”项下的色谱条件进样，以色谱峰面积作为纵坐标，对照品的含量作为横坐标，进行回归处理，得到线性回归方程分别为：Y=4.12×105-2.52×103（r=0.9998）（去氢紫堇碱在0.345～3.315μg范围内线性关系良好）；Y=2.43×105-3.12×104（r= 0.9997）（延胡索乙素在0.190～1.359μg范围内线性关系良好）。

2.6精密度考察：吸取延胡索乙素对照品溶液，按照“2.2”项下的色谱条件重复进样5次，峰面积的RSD值为0.21％，表明高效液相色谱仪的精密度好。

2.7稳定性考察：取“2.3”项下的供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h按照色谱条件进样10μL，测定峰面积值，其RSD值为1.95％，表明供试品溶液在24h内有较好的稳定性。

2.8重复性考察：取同一批延胡索样品分别重复进样5次，测定延胡索乙素的含量，其RSD值为1.75％，表明该方法的重复性较好。

2.9加样回收率试验：取5份已知含量的样品，延胡索乙素含量为测定参照，将适量的延胡索乙素对照品溶液加入5份样品，按照色谱条件进样，以回归方程进行样品含量的测定，计算加样回收率，见表1。

表1　延胡索乙素加样回收率

2.10样品含量测定：各炮制品供试品溶液，按照“2.2”项下的色谱条件进样测定峰面积，按照线性回归方程对含量进行计算，见表2。

表2　样品中延胡索乙素、去氢紫堇碱的含量

3　小结

中药延胡索作为临床上经常用于治疗疾病的药物，多数均以炮制品的形式应用于临床，经酒炙后的延胡索有效成分生物碱会生成易溶性的醋酸盐，提高了溶出率[6]。从上述表格中的数据可见，延胡索生品与延胡索炮制后的水煎液含有的成分性质完全一致，生物碱的含量经醋炙后的延胡索水煎液中含量最高，而不经过任何炮制的延胡索生物碱的含量最低，酒炙品的含量居中。治疗疾病的有效成分的增加可以增强药材在临床上的疗效，进而证实延胡索经醋炙后治疗效果的有效性。

由上述可知，几种延胡索炮制品经比较，延胡索的醋炙品以及酒炙品是临床上最为常用的药材炮制品种，本次实验中采用的超声提取方法对延胡索各种炮制品，提取方式简单，容易操作，另HPLC法在检测延胡索乙素、去氢紫堇碱时精密度高、重复性好，醋炙、酒炙、醋烘等炮制方法均可以增加延胡索有效成分的含量。

[1]徐捷.不同炮制方法对延胡索有效成分影响研究[J].河北医药，2013，35（3）：454-456.

[2]沈志冲.元胡不同炮制方法对延胡索乙素含量的影响[J].现代预防医学，2011，38（21）：4454-4457.

[3]郑弘，许红玮.延胡索不同炮制方法的薄层色谱鉴别对比研究[J].中医学报，2013，28（5）：695-696.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：121-125.

[5]刘传统，祁红.HPLC法测定益气养阴合剂中厚朴酚和延胡索乙素的含量[J].云南中医中药杂志，2015，36（1）：59-61.

[6]李荣，蔡青青，牛彦兵，等.熟延胡索饮片药理作用的对比研究[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（19）：133-137.

·药物与临床·

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1672-8351（2016）11-0005-02