黄司法，唐志敏，杨礼香

（广州大学生命科学学院，广东 广州　510006）

香蕉BBI型蛋白酶抑制剂（MaBBI1）的诱导、变性和复性

黄司法，唐志敏，杨礼香

（广州大学生命科学学院，广东 广州510006）

BBI（Bowman-Birk protease inhibitor）是一种富含半胱氨酸的植物蛋白酶抑制剂，其抑制的蛋白酶主要包括胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶等丝氨酸蛋白酶。以从香蕉（Musa acuminata L. cv.Brazilian）根中提取的总RNA逆转录成的cDNA为模板，根据NCBI公布的野生型马来西亚蕉（Musa acuminata subsp. Malaccensis）BBI基因（收录号：XM_009415512）的序列设计引物，克隆了1个BBI型蛋白酶抑制剂基因（MaBBI1）。MaBBI1基因大小为381 bp，编码126个氨基酸，包括12个半胱氨酸（9.5%），将该基因构建到载体pGEX-6P-1上转化大肠杆菌Rossetta菌株进行重组蛋白GST-MaBBI1的诱导表达。在IPTG诱导3 h后，一个预测分子量为40.8953 ku的GST-MaBBI1融合蛋白被大量表达。IPTG诱导后的GST-MaBBI1融合蛋白是不溶的并累积成包涵体，通过对包涵体进行变性和复性的方法得到可溶的GST-MaBBI1融合蛋白，为进一步在体外研究该蛋白的功能奠定基础。

香蕉；Bowman-Birk蛋白酶抑制剂（BBI）；诱导；变性；复性

黄司法，唐志敏，杨礼香. 香蕉BBI型蛋白酶抑制剂（MaBBI1）的诱导、变性和复性［J］.广东农业科学，2016，43（9）：44-50.

蛋白酶抑制剂广泛存在于动植物中，可抑制不同来源的蛋白水解酶。植物含有大量的蛋白酶抑制剂，生殖器官、储藏器官和营养器官均可表达此类蛋白。植物在正常生长发育、遭遇草食性动物侵食、病原菌和害虫侵害时均可产生蛋白酶抑制剂以抵御病虫害［1-2］。目前，59个不同的蛋白酶抑制剂家族已经被归类［3］，其中富含半胱氨酸的蛋白酶抑制剂被归纳为BBI（Bowman-Birk protease inhibitor）家族［4］。BBI最早由Bowman在大豆中发现，并由Birk纯化［5-6］，其抑制的蛋白酶主要包括胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶等丝氨酸蛋白酶［7］。……