樊红日李 健陈 宝沈 芳张立颖

（1.广西工业职业技术学院，广西 南宁 530001；2.广西大学化学化工学院，广西 南宁 530004）

迷迭香中抗氧化剂总酚含量的测定

樊红日1李 健1陈 宝2沈 芳2张立颖1

（1.广西工业职业技术学院，广西 南宁 530001；2.广西大学化学化工学院，广西 南宁 530004）

通过对春、秋、冬三季迷迭香干料和春季鲜料提取得到的抗氧化剂进行总酚含量测定，得出干料提取得到的抗氧化剂总酚含量比鲜料高，且秋季迷迭香干叶制得的抗氧化剂的总酚含量最高，达到 297mg/g，因此抗氧化剂的提取最好选择秋季干叶为原料。

迷迭香；抗氧化剂；总酚含量

迷迭香是一种非常名贵的天然香料植物，原产于欧洲地中海沿岸地区。它是唇形常绿灌木，普通树高40～80cm，最高时可达 150cm。迷迭香花呈淡蓝或近白色，其茎叶清香，一般在6、7月间开花。迷迭香可家庭盆栽或地栽，摆放在阳台、庭院或室内，散发的芳香味可以净化空气，给人清幽安谧的感觉［1］。

目前在世界上许多地区均有种植迷迭香。我国是1981年才首次将迷迭香引入。目前，我国南方的云南、贵州、广西、海南和新疆等地已广为栽种迷迭香［2］。

迷迭香抗氧化剂是从迷迭香植物中提取的具有抗氧化活性的一系列物质构成的混合物，分为脂溶性和水溶性两种［3］。迷迭香脂溶性抗氧化剂的主要成分包括二萜酚类和二萜酮类化合物。目前已经分离鉴定出的二贴酚类有鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、表迷迭香酚、异迷迭香酚、迷迭香二醛、迷迭香二酚、迷迭香宁、异迷迭香宁等化合物。二萜酮类有表单参酮、落羽松二醌等。三萜类有主要有:齐墩果酸、熊果酸、桦木醇、桦木酸、19-α-羟基熊果酸、2-β-羟基-齐墩果酸、表-α-香树脂醇、蒲公英赛醇、香树脂素、羽扇豆醇、蒲公英泌醇、日耳曼醇、胆措醇、谷幽醇等，还有些黄酮类，有机酸等。而水溶性抗氧化剂的主要成分大多都是酸类，分别为:迷迭香酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸，L-抗坏血酸、橙皮昔和异橙皮昔等［4-6］。

由此可见，抗氧化剂中总酚物质的多少可以作为衡量所制得的抗氧化剂质量的标准之一，本文拟用乙醇提取迷迭香得到脂溶性抗氧化剂，通过对其总酚含量进行测定来检验所制得抗氧化剂的质量。

1 迷迭香抗氧化剂的制备工艺

本实验所用迷迭香来自广西巴马县。摘取一定量的秋季迷迭香枝叶，粉碎后采用水蒸气蒸馏法提取精油，将过滤得到的残渣用95%工业酒精提取两次，所得浸提液用活性炭回流脱色一小时后浓缩，用热水洗涤滤渣后即得脂溶性抗氧化剂，而洗涤得到的滤液经蒸馏至浸膏状即为水溶性抗氧化剂，工艺流程见图1。

图1 迷迭香抗氧化剂提取工艺流程图

2 抗氧化剂中总酚含量的测定

在碱性溶液中，多酚类化合物可以将钨钼酸还原（W6+→W5+）生成蓝色化合物［7］，颜色的深浅与多酚含量成正相关，该蓝色化合物在760nm有最大吸收［3］。一般用没食子酸作为参照标准。提取物中总多酚的含量以等同于没食子酸的量表示。

2.1 福林-酚试剂的制配

在1L的磨口回流装置内加入50g钨酸钠（Na2WO4·2H2O），12.5g钼酸钠（Na2MoO4·2H2O），350mL水，再加25mL85%磷酸和50mL浓盐酸，充分混合，内置搅拌子，在110～120℃的甘油浴中连续回流10h。

再加入87.36g硫酸锂（Li2SO4·H2O）及数滴液溴，继续沸腾15min以去除过量的溴。最后颜色呈黄色后冷却至室温后定容至500mL，用滤纸过滤后，置于棕色瓶中备用［8］。

2.2 最佳波长的选择

称取2g迷迭香脂溶性抗氧化剂，用无水乙醇溶解后定容至100mL，从中取出1mL于10mL容量瓶中，依次加入1mL蒸馏水，0.5mL福林-酚试剂进行混合，在0.5～8min内，再加入1.5 mL20% Na2CO3溶液后用水定容。室温下放置2h后，用紫外分光光度计在500～800nm的光谱范围内进行扫描，找出最大吸收波长。

2.3 没食子酸的提纯

称取没食子酸约5g于烧杯中，加入50mL蒸馏水，在50℃的水浴中加热溶解，得到浅黄色溶液。用滤纸趁热过滤，滤液冷却至室温后，烧杯内出现白色絮状结晶物。抽虑结晶，于110℃干燥至恒重，放在棕色瓶保存。

2.4 没食子酸标准曲线的制定

准确称取经提纯的没食子酸0.5000g，用10mL无水乙醇溶解，并用蒸馏水定容至100mL，用移液枪分别移取0，30，40，50，60，70，80，100μL到10mL的容量瓶中，依次加入1mL蒸馏水，混合；再加入0.5mL福林-酚试剂进行混合，在0.5～8min内，加入1.5mL20%Na2CO3充分混合后定容。在室温下放置2h后，用分光光度计于500～800nm的波长范围进行光谱扫描，测定吸光值。以前面所测得的样品最佳吸收波长为基准，找出各浓度没食子酸在最佳吸收波长下的吸光度，并以此为纵坐标，以没食子酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.5 样品中总酚含量的测定

样品溶液的配制：准确称取自制抗氧化剂样品0.2g左右，脂溶性抗氧化剂用10mL无水乙醇溶解（水溶性用水溶解），然后用无水乙醇（水溶性用蒸馏水）定容至100mL。

取1mL样品溶液加入到10mL容量瓶中，依次加入1mL蒸馏水，混合；再加入0.5mL福林-酚试剂进行混合，在0.5～8min内，加入1.5mL20%Na2CO3溶液充分混合后定容。室温下放置2h后，用分光光度计于500～800nm的波长范围进行光谱扫描，测定吸光值。找出在最佳波长下的吸光值，并根据此吸光值从标准曲线上算出相应的总酚浓度，同时做空白实验。总酚含量按以下方法计算：

式中：a——单位抗氧化剂所含有酚的质量，以没食子酸计量，单位mg（没食子酸）/g（抗氧化剂）

c——用于测量吸光值的抗氧化剂浓度，mg/mL

c1——在浓度c下测得相应吸光值后，带入标准曲线得

到的酚的浓度，mg/mL。

3 实验结果与讨论

（1）最佳吸收波长的确定

通过光谱扫描图可确定最佳吸收波长为755nm。

（2）没食子酸标准曲线的绘制

按照福林-酚比色法测得了对照品没食子酸不同浓度下的吸光值，并绘制了标准曲线（c-A 曲线）如图2所示。

图2 总酚含量测定没食子酸标准去曲线

由图2可知，该标准曲线的相关系数R2=0.997，得到没食子酸浓度（c，mg/mL）-吸光度A（755nm）的线性方程为y（A）=13.08x（c）-0.086。由于吸光光谱稳定，所制得的标准曲线仍具有较好的线性关系。

（3）样品总酚含量的测定

所称取的抗氧化剂质量及所配成的浓度见表1和表2。

表1 脂溶性抗氧化剂及相应吸光值

表2 水溶性抗氧化剂及相应吸光值

将表1和表2所得到的吸光值代入图2标准曲线的线性方程可分别得到不同浓度抗氧化剂中酚的浓度（以没食子酸计），再按总酚含量计算式可计算出各抗氧化剂的酚含量，并制得表。

表3 抗氧化剂的酚含量

4 结论

从表3可知，三个季节提取得到的水溶性抗氧化剂的酚含量比脂溶性抗氧化剂要高，而春季鲜叶制得的脂溶性抗氧化剂酚含量比水溶性的高。就总酚含量而言（脂溶性抗氧化剂与水溶性抗氧化剂酚含量的总和），干料提取得到的抗氧化剂总酚含量比鲜料的高，且秋季迷迭香干叶制得的抗氧化剂的总酚含量最高，达到297mg/g，因此抗氧化剂的提取最好选择秋季干叶为原料。

［1］ 孙尚贤.芳香植物-迷迭香［J］.中国花卉园艺，2002，（21）:17.

［2］ 张冲，冯玉红，周雪晴，等.迷迭香挥发油成分分析［J］.海南大学学报自然科学版，2008，26（1）:74-77.

［3］ 韩宏星，宋志宏，屠鹅飞.迷迭香水溶性成分研究［J］.中草药，2001，32（10）:877-878.

［4］ 张保顺，袁吕江，冯敏，等.迷迭香天然抗氧化剂研究及其应用［J］.粮食与油脂，2004，（11）:9-10.

［5］ 吴蒙，徐晓军.迷迭香化学成分及药理作用最新研究进展［J］.生物质化学工程，2016，50（3）:51-57.

［6］ 程贤，毕良武，赵振东，等.迷迭香酸的提取纯化及生物活性研究进展［J］.林产化学与工业，2015，35（4）:151-158.

［7］ 凌关庭.抗氧化食品与健康［M］.北京:化学工业出版社，2004:58-60.

［8］ C.S.ough，M.A.Amerine.Methods for Analysis of Musts and Wines（second edition）［M］.New York:J.Wiley and sons，1988:203-205.

Determine of total phenol contention of antioxidant from rosemary

The antioxidants of dry and fresh leaves from rosemary in spring， autumn， winter three seasons were extracted and the total content of phenol was measured. The results showed that the total content of phenol of dry leaves was higher than that of the fresh ones .And dry leaves in autumn was the highest， which could up to 279mg/g. So the ideal raw material for extracting antioxidants was dry leaves in autumn.

Rosemary； antioxidants； total content of phenol

O657

A

1008-1151（2016）08-0045-02

2016-07-13

广西教育厅科研项目（2013YB331）；广西工业职业技术学院科研基金（桂工业院科研 2012003005）；南宁市科学研究与技术开发项目（20155345）。

樊红日（1966-），男，广西忻城人，广西工业职业技术学院高级实验师，从事物质中成分的分析及检测。