胡丽芳，李岚，黄文珍，刘彤

子痫前期患者外周血及胎盘组织中半乳糖凝集素1的表达及意义

胡丽芳，李岚，黄文珍，刘彤

目的：探讨子痫前期患者外周血及胎盘组织中半乳糖凝集素1（galectin-1，Gal-1）的表达及意义。方法：选取我院收治的早发型重度子痫前期患者53例为观察组，同期入院体检正常的孕妇53例为对照组。采用酶联免疫法检测血清Gal-1的浓度，经免疫组织化学法检测胎盘组织Gal-1蛋白的表达。结果：观察组和对照组外周血Gal-1浓度分别为（38.59±9.02）ng/L和（27.33±8.31）ng/L，2组比较差异有统计学意义（t=6.684，P＜0.001）。观察组胎盘组织Gal-1的表达高于对照组，差异有统计学意义（Z=5.632，P＜0.001）。结论：Gal-1可能与早发型重度子痫前期的发病有关，或可成为有价值的预测子痫前期的生物标记物。

先兆子痫；半乳糖凝集素1；血液化学分析；胎盘

子痫前期是归属于妊娠期高血压疾病范畴的临床常见的妊娠期并发症。子痫前期患者临床上主要表现出高血压和蛋白尿等症状［1］。我国约5%～7%的妊娠期妇女会发生子痫前期，该病是引起围生期母婴死亡的重要危险因素［2］。临床上以孕34周为分界点，将子痫前期划分为早发型和晚发型。早发型子痫前期发病早、病情进展迅速，易引起严重不良妊娠结局，已成为国内外产科医生面临的棘手问题［3］。在胎盘组织中，半乳糖凝集素1（galectin-1，Gal-1）是第1个被发现的半乳糖凝集素家族成员，其与多种妊娠期疾病相关［4］。本研究通过分析53例早发型重度子痫前期患者外周血及胎盘组织中Gal-1水平的变化，探讨子痫前期患者外周血及胎盘组织中Gal-1的表达及其意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2014年1月—2015年1月在江汉大学第二附属医院（我院）就诊的53例早发型重度子痫前期患者为观察组，以及53例同期体检正常的孕妇为对照组。观察组患者年龄23～32岁；孕期22～32周。对照组孕妇年龄24～32岁，孕期22～33周。根据《妇产科（第8版）》对早期重度子痫前期的诊断为依据［5］：①处于妊娠期的第20～34周；②收缩压≥160mmHg（1mmHg=0.133 kPa）或（和）舒张压≥110mmHg；③24 h蛋白尿≥500mg；④肝肾功能异常［谷丙转氨酶（ALT）升高，血清肌酐（SCr）＞106μmol/L］；⑥血小板下降；⑦出现头痛以及上腹部不适等。排除标准：①伴其他妊娠期并发症；②既往高血压或（和）糖尿病史；③多胎。2组孕妇的年龄、体质量指数（BMI）、孕周、初潮时间、生育史、流产史、血样采集和胎盘组织留取孕周等一般资料比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。见表1。

1.2 标本采集

1.2.1 血样采集入院经确诊为早发型重度子痫前期后，即留取肘正中静脉血4mL，4℃下离心后分离血清，-20℃冰柜保存待测。

表1 2组一般资料（±s）

表1 2组一般资料（±s）

注：生孕史，流产史用中位数（百分位数）［M（P25，P75）］表示。

胎盘组织留取孕周观察组53 26.6±2.6 31.3±2.3 12.2±2.1 2（1，3）2（1，4）30.8±2.2 36.8±2.4对照组53 25.8±2.4 31.7±2.8 11.9±2.2 2（1，3）2（1，3）31.2±2.3 37.4±2.3 t或Z 1.646 0.804 0.718 3.147 2.519 0.915 1.314 P 0.103 0.423 0.474 0.637 0.684 0.362 0.192组别n年龄（岁）孕周初潮时间（岁）生育史（胎）流产史（次）血样采集孕周

1.2.2 胎盘组织采集剖宫产胎盘娩出后，取近脐带3 cm处胎盘组织1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm，磷酸盐缓冲液（PBS）洗净后，用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片。

1.3 酶联免疫吸附测定（ELISA）检测外周血Gal-1浓度检测操作步骤按照人Gal-1 ELISA试剂盒（Santa Cruz Bicycles公司，美国）说明进行：①将Gal-1标准品稀释成不同系列浓度；②设置标准品孔、待检样品孔以及空白孔，各3个复孔；③除空白孔外，各孔加入相应的样品；④37℃孵育0.5 h后，洗涤5次，甩干；⑤除空白孔外，各孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记试剂；⑥重复步骤4；⑦各孔加入显色剂，37℃避光15min；⑧加终止液；⑨450 nm处测各孔光密度（OD）值，空白调零。以标准的浓度为横坐标，纵坐标为相应的OD值，绘制“浓度-OD”曲线，然后计算出样品的浓度。

1.4 免疫组化SP染色法检测胎盘Gal-1蛋白表达检测操作步骤按照人Gal-1免疫组化检测试剂盒（Santa Cruz Bicycles公司，美国）的说明进行：组织切片脱蜡；60℃烤箱烘烤2 h；经二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化；采用柠檬酸高压抗原修复法修复；在37℃的3%的H2O2溶液中孵育10min；经PBS洗涤后，加入一抗，4℃孵育24 h；经PBS洗涤后，加入荧光标记的二抗，37℃孵育0.5 h；加入显色剂显色；经苏木素复染，梯度乙醇水化，二甲苯透明；封片。染色度评分：强染色3分，中度染色2分，弱染色1分。阳性细胞比例评分，11%～50%比例2分，51%～75%比例3分，＞75%比例4分。综合染色强度和阳性细胞比例进行分析：2～3分弱阳性，4～5分中度阳性，6～7分强阳性。此外，无论染色的强度如何，只要细胞阳性比例＜10%，都认为是阴性。

1.5 统计学方法统计分析采用SPSS 19.0统计软件。定量资料符合正态分布的数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；非正态分布的数据用M（P25，P75）表示，组间比较用轶和检验。等级资料比较采用秩和检验。阳性率比较用卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组产妇外周血Gal-1浓度比较观察组外周血Gal-1浓度为（38.59±9.02）ng/L，对照组为（27.33±8.31）ng/L，2组比较差异有统计学意义（t= 6.684，P＜0.001）。

2.2 2组胎盘组织Gal-1蛋白表达观察组胎盘组织Gal-1的表达高于对照组，差异有统计学意义（Z= 5.632，P＜0.05），见表2。胎盘组织Gal-1呈棕黄色染色，见图1（见封三）。

表2 2组胎盘组织Gal-1蛋白表达情况（例）

3 讨论

现代生殖免疫学认为，胚胎是携带父方抗原的同种异体物，母体通过多种途径建立和维持母胎免疫耐受。妊娠期免疫耐受的失衡，释放大量的炎性因子，血管内皮功能损伤，增加胎盘滋养细胞凋亡，最终导致子痫前期的发生［6］。CD4+T细胞各亚型和相关细胞因子在母胎的双向免疫调节中发挥了重要作用，在抗原刺激下，分化为辅助性T细胞1型（Th1）、Th2、Th17和调节性T细胞（Treg）4种亚型，共同维持机体免疫平衡。正常妊娠时，具有抗炎性和维持自身免疫耐受的Th2和Treg细胞数量上升，而促炎性Th1和Th17细胞数量下降［7］。母胎免疫耐受失衡，促进炎性Th1和Th17细胞数量增加，而Th2和Th17细胞数量减少，Th1/Th2及Th17/Treg失衡，导致大量炎症因子的释放，血管内皮细胞损伤，全身小动脉痉挛，最终导致子痫前期的发生［8］。

Gal是多功能细胞调控因子家族，具有相当广泛的生物活性，参与胚胎的发生，细胞的增殖和凋亡等［9］。Gal-1能够抑制中性粒细胞渗出，继而调节炎性细胞的迁移；能够抑制T细胞介导的自身免疫疾病；能够降低宿主对同种异体物的免疫反应，促进免疫耐受［10-11］。Molvarec等［12］研究显示，子痫前期孕妇外周血以及胎盘组织中Gal-1水平较正常妊娠孕妇明显上升。Than等［13］发现，绒毛膜羊膜炎患者胎盘组织以及滋养细胞中Gal-1的水平明显上升。Rabinovich等［14］研究证实，Gal-1能够诱导活化的Th1和Th17细胞凋亡，或向Th2或Treg细胞转换，抑制促炎细胞因子释放，从而增强免疫耐受。Gal-1可以通过调节绒毛外滋养细胞上的人白细胞抗原G的表达，使绒毛外滋养细胞逃避自然杀伤（NK）细胞的攻击，促进免疫逃逸［15］。本研究分析了早发型重度子痫前期患者外周血以及胎盘组织中Gal-1的水平，发现患者外周血Gal-1水平高于正常孕妇，胎盘组织中Gal-1蛋白的表达也高于正常孕妇。提示早发型重度子痫前期患者免疫耐受失衡，并伴有Gal-1水平的上升，究其原因可能是因为患者Th1/Th2及Th17/ Treg失衡，反过来激活Gal-1，导致其表达水平上升，以维持正常妊娠。研究发现，Gal-1基因敲除小鼠流产率上升，给予Gal-1处理后，可以通过Gal-1诱导子宫免疫耐受性树突细胞的扩张和招募，继而促进Treg分化Th2和Treg，维持免疫耐受，降低其流产率［16］。因此可考虑将Gal-1作为“报警蛋白”，通过对Gal-1水平的检测而对子痫前期患者的病情发展做出判断。

综上所述，早发型重度子痫前期患者血清和胎盘组织中Gal-1的水平升高，提示Gal-1可能与早发型重度子痫前期的发病有关，或可成为有价值的预测子痫前期的生物标记物。

［1］邵晓曼.早发型重度子痫前期期待治疗对妊娠结局的影响［J］.中国妇幼保健，2014，15（1）：34-35.

［2］吕涌娅.早发型重度子痫前期发病及母婴结局的临床分析［J］.实用妇产科杂志，2015，26（2）：146-148.

［3］刘伟武.早发型重度子痫前期不同孕龄与母婴结局的关系研究［J］.重庆医学，2014，3（8）：932-934.

［4］Nio-Kobayashi J，Abidin HB，Brown JK，et al.The Expression and Cellular Localization of Galectin-1 and Galectin-3 in the Fallopian Tube Are Altered inWomenwith Tubal Ectopic Pregnancy［J］.Cells TissuesOrgans，2015，200（6）：424-434.

［5］康宁.妇产科学［M］.8版．西安：第四军医大学出版社，2013.

［6］李大金.母-胎界面交互对话介导母-胎免疫耐受［J］.生殖医学杂志，2014，23（3）：209-211.

［7］王艳，周小丽，杨青.T细胞亚群及其免疫分子介导的妊娠免疫耐受分析［J］.中外医学研究，2014，9（24）：159-160.

［8］周小丽，王绍娟.T细胞亚群及其免疫分子介导的妊娠免疫耐受研究进展［J］.广东医学，2013，34（8）：1292-1294.

［9］吕圆，刘爱霞，朱依敏.半乳糖凝集素1与妊娠的相关性研究［J］.国际生殖健康/计划生育杂志，2014，33（2）：120-123.

［10］梁磊，宋静慧，陈秀娟.母胎界面半乳糖凝集素的表达及其在妊娠中的作用［J］.中华妇产科杂志，2013，48（1）：58-60.

［11］董立园.半乳糖凝集素1，3在不明原因不孕症子宫内膜、正常子宫内膜及早孕蜕膜中的表达及意义的研究［D］.石家庄：河北医科大学，2012.

［12］Molvarec A，Blois SM，Stenczer B，et al.Peripheral blood galectin-1-expressing T and natural killer cells in normal pregnancy and preeclampsia［J］.Clin Immunol，2011，139（1）：48-56.

［13］Than NG，Kim SS，Abbas A，et al.Chorioamnionitis and increased galectin-1 expression in PPROM--an anti-inflammatory response in the fetalmembranes？［J］.Am JReprod Immunol，2008，60（4）：298-311.

［14］Rabinovich GA，Sotomayor CE，Riera CM，et al.Evidence of a role for galectin-1 in acute inflammation［J］.Eur J Immunol，2010，30（5）：1331-1339.

［15］Tirado-González I，Freitag N，Barrientos G，et al.Galectin-1 influences trophoblast immune evasion and emerges as a predictive factor for the outcome of pregnancy［J］.Mol Hum Reprod，2013，19（1）：43-53.

［16］Blois SM，Ilarregui JM，Tometten M，etal.A pivotal role forgalectin-1 in fetomaternal tolerance［J］.NatMed，2007，13（12）：1450-1457.

The Expression of Galectin-1 in Peripheral Blood and Placental Tissue of Preeclampsia Patients and Its Significance

HU

Li-fang，LILan，HUANGWen-zhen，LIU Tong.Department of Obstetrics，The Second Affiliated Hospital of Jianghan University，Wuhan 430050，China

HU Li-fang，E-mail：changq888@126.com

Objective：To investigate the expression ofgalectin-1 in peripheralblood and placental tissue ofpreeclampsia patients and its significance.Methods：A total of53 cases of early onset severe preeclampsia and 53 cases of normal pregnant peoplewere selected as research objects.The concentration ofserum Gal-1 was detected by ELISA and the expression ofGal-1 protein in placenta tissuewas detected by immunohistochemistry.Results：The concentration of serum Gal-1 of the observation group and the control group were（38.59±9.02）ng/L and（27.33±8.31）ng/L，respectively.Therewas significant differences between the two groups（t=6.684，P＜0.001）.The expression ofGal-1 protein in observation group was significantly higher than that in the controlgroup（Z=5.632，P＜0.001）.Conclusions：Gal-1may be related to the early onset severe preeclampsia.It may be a valuablebiomarker forpredicting preeclampsia.

Pre-eclampsia；Galectin 1；Blood chemicalanalysis；Placenta（JInt Obstet Gynecol，2016，43：561-562，573，封三）

2016-04-15）

［本文编辑王琳］

武汉市卫生和计划生育委员会课题（WX15D29）

430050武汉，江汉大学第二附属医院产科

胡丽芳，E-mail：changq888@126.com