程永科，李锐，陈祖利

（河南中帅医药科技股份有限公司，河南郑州451000）

HPLC 法测定盐酸法舒地尔注射液与葡萄糖注射液配伍液中的5-羟甲基糠醛

程永科，李锐，陈祖利

（河南中帅医药科技股份有限公司，河南郑州451000）

目的测定盐酸法舒地尔注射液与葡萄糖注射液配伍液中的5-羟甲基糠醛（5-HMF）。方法采用高效液相色谱法（HPLC），色谱柱：Wetch C18柱（150.0 mm×4.6 mm×5.0 μm），流动相：0.05 mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈（89∶11），流速：1.0 mL/min，检测波长：284 nm，柱温：25℃，进样量：20 μL。结果5-HMF在1.45～2.61 μg/mL内线性关系良好（r= 0.9998）；平均回收率为97.4%（RSD=1.1%）。结论采用HPLC测定盐酸法舒地尔注射液与葡萄糖注射液配伍液中的5-HMF方法简便，准确可靠。

色谱法，高压液相；盐酸；葡萄糖；注射剂；药物配伍禁忌；糠醛/类似物和衍生物

盐酸法舒地尔作为一种新型、高效的血管扩张药，是全球唯一一个Rho激酶抑制剂，也是新型细胞内钙离子拮抗剂，主要适应证为脑血管疾病。盐酸法舒地尔注射液用于改善和预防蛛网膜下腔出血术后的脑血管痉挛及引起的脑缺血症状［1］。根据使用说明书，本品使用时需用葡萄糖注射液稀释，而5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural，5-HMF）是含糖溶液中主要控制的杂质，其对人体横纹肌及内脏有损害，具有神经毒性，能与人体蛋白质结合产生蓄积中毒［2］。因此，《中国药典》从1985年版开始对葡萄糖注射液中5-HMF含量作了限量规定。朱大胜等［3］已对盐酸法舒地尔注射液和葡萄糖注射液的配伍进行了研究，但是没有考察5-HMF；也有众多学者对5-HMF进行了研究［4-13］。盐酸法舒地尔注射液与葡萄糖注射液混合后是否产生5-HMF对用药安全至关重要。本文建立了测定配伍液中5-HMF含量的方法，旨在为临床安全用药提供参考。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1一般材料盐酸法舒地尔注射液（自制，批号：20151012、20151013、20151014，规格：2 mL∶30 mg）；葡萄糖注射液（四川科伦药业股份有限公司，批号：B15040601，规格：500 mL∶50 g）。

1.1.2仪器与试剂

1.1.2.1仪器日本岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪；BP211D电子天平（德国赛多利斯集团）；Phs-3C pH计（上海精密科学仪器有限公司）；日本岛津UV-1800紫外分光光度仪。

1.1.2.2试剂5-HMF对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111626-200402）；甲醇（色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司）；其余试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1色谱条件与系统适用性色谱柱：Wetch C18柱（150.0 mm×4.6 mm×5.0 μm），流动相：0.05 mol/L磷酸二氢铵溶液-乙腈（89∶11），流速：1.0 mL/min，检测波长：284 nm，柱温：25℃，进样量：20 μL。

1.2.2供试品溶液的配制取盐酸法舒地尔注射液1支，与100 mL 5%葡萄糖溶液配伍，加水稀释5倍，制成每毫升含盐酸法舒地尔0.06 mg、含葡萄糖10 mg的溶液，作为配伍供试品溶液。

1.2.3对照品溶液的配制取5-HMF对照品适量，精密称定，加水制成每毫升约含2.0 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。

1.2.4空白溶液的配制取盐酸法舒地尔注射液1支，加水制成每毫升含盐酸法舒地尔0.06 mg溶液，作为空白溶液。

1.2.5配伍溶液配置取本品1支，与100mL 5%葡萄糖溶液配伍，加水稀释5倍，制成每毫升含盐酸法舒地尔0.06 mg，含葡萄糖10 mg的溶液，于室温下放置。

1.2.6限度范围的确定根据《中国药典2015年版二部》盐酸法舒地尔注射液项下5-HMF的规定，10 mg/mL的葡萄糖溶液，按照紫外-可见分光光度法《中国药典2015年版二部附录ⅣA》，在284 nm波长处的吸光度不得大于0.32。

精密称取5-HMF 5.8 mg，置于10 mL量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，作为5-HMF储备液（500 μg/mL）。精密量取5-HMF储备液1 mL，置100 mL量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2、3、4、5、6 mL置于10 mL量瓶中，按照紫外-可见分光光度法，分别在284 nm波长处测定吸光度。

1.2.7定量限与检测限取5-HMF储备液适量，加水依次稀释制成每毫升约含0.020、0.010、0.005 μg的溶液，取样20μL注入液相色谱仪，当浓度为0.020μg/mL时，信噪比（S/N）约为10，计算得定量限；浓度为0.010 μg/mL时，色谱图S/N约为3∶1，计算得检测限。

1.2.8线性试验精密称取5-HMF5.8mg，置于10 mL量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，再精密量取1 mL，置于100 mL量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mL置于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，分别精密量取20 μL，注入液相色谱仪，以浓度对峰面积进行线性回归。

1.2.9溶液重复性试验取5-HMF储备液适量，加水制成每毫升约含2.0 μg/mL的溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图。

1.2.10回收率试验取定量限浓度，限度浓度和150%限度浓度样品进行准确度试验，即供试品浓度分别为0.02、2.00、3.00 μg/mL，取各供试品溶液和对照品溶液，照高效液相色谱法，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算回收率。见表4。

1.2.11溶液稳定性试验取5-HMF储备液适量，加水制成每毫升约含2.0 μg/mL的溶液，作为对照品溶液；于室温下放置8 h，分别于第0、1、2、4、6、8小时，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，考察5-HMF的主峰面积，比较不同时间峰面积的变化。

1.2.12配伍液中5-HMF的变化按照1.2.1的色谱条件，精密量取供试品溶液及对照品溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如显5-HMF峰，其面积不得大于对照品溶液中主峰的面积（0.020%）。

2　结果

2.1色谱条件和系统适用性对照品溶液色谱峰的理论板数大于3 000，空白溶液不干扰，供试品溶液未检出。

2.2限度范围的确定以吸光度A对浓度C进行线性回归，得线性回归方程：y=0.158 8x+0.001 4，相关系数（r）=0.999 8。见表1。5-HMF在1.16～3.48 μg/mL内线性良好，经计算吸光度为0.32时浓度应为2.006 297 μg/mL，即限度应为0.020%，参考《中国药典2010版二部》，将5-HMF控制在0.020%（按葡萄糖含量计算）左右，葡萄糖溶液浓度为10 mg/mL时，5-HMF对照品溶液浓度应为2.0 μg/mL。

表1　5-HMF线性试验结果（紫外吸收）

2.3定量限与检测限定量限约为0.4 ng，检测限约为0.2 ng。

2.4线性试验以浓度对峰面积进行线性回归，得线性回归方程：y=81358x-53.1，r=0.999 9，见表2。5-HMF在1.45～2.61 μg/mL内线性良好。

表2　5-HMF测定线性试验结果（HPLC法）

2.5溶液重复性试验RSD=0.27%，说明本品重复性良好。见表3。

表3　5-HMF重复性试验测定结果

2.6回收率试验RSD=1.1%，说明采用HPLC测定5-HMF含量回收率高，准确度良好。见表4。

表4　5-HMF含量测定回收率试验结果（HPLC法）

2.7溶液稳定性试验RSD=0.07%，说明对照品溶液在室温下8 h内基本稳定。见表5。

表5　配伍溶液及5-HMF稳定性试验测定结果

2.8配伍液中5-HMF的变化各批样品配伍溶液中的5-HMF均小于限度0.02%。见表6。

表6　5-HMF测定结果

3　讨论

3.1色谱条件的选择。对照品溶液进行紫外扫描，最大吸光度值在284 nm，故选该波长进行检测。采用了盐酸法舒地尔含量的色谱条件，盐酸法舒地尔和5-HMF可以同时检测，相互不干扰。

3.2文献［3］中关于盐酸法舒地尔和葡萄糖注射液的配伍，在配伍8 h内外观、pH、含量及液相色谱峰形无明显变化，说明相互配伍未见化学反应及结构的改变，且不溶性微粒符合药典规定。本研究结果表明，盐酸法舒地尔注射液和葡萄糖注射液在配伍8 h内没有产生5-HMF，说明配伍没有问题，可以安全使用。

3.3HPLC用于检测盐酸法舒地尔注射液和葡萄糖注射液配伍中的5-HMF含量，结果满意，可作为国内同类产品的借鉴，在研发药品过程中，要考虑使用过程中产生的风险，尤其是对注射用药品，要对配伍液进行考察。

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Determination of 5-HMF in compatibility solution of Fasudil Hydrochloride Injection and Glucose Injection by HPLC

ChengYongke，LiRui，ChenZuli
（ZhongshuaiPharmaceuticalScience&TechnologyCo.，Ltd.，Zhengzhou，Henan451000，China）

ObjectiveTo establish a HPLC method for determining the 5-HMF content in the compatibility solution of Fasudil Hydrochloride Injection and Glucose Injection by HPLC.MethodsThe HPLC method was adopted with the chromato graphic column of Wetch C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase was 0.05 mol/L ammonium dihydrogen phosphateacetonitrile（89∶11），the flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was maintained at 25℃，the detection wavelength was 284 nm，the injection volume was 20 μL.Results5-HMF had good linear relation in the range of 1.45-2.61 μg/mL（r=0.999 8）. The average recovery rate was 97.4%（RSD=1.1%）.ConclusionAdopting the HPLC method for detecting the 5-HMF content in the compatibility solution of Fasudil Hydrochloride Injection and Glucose Injection is simple，accurate and reliable.

Chromatography，high pressure liquid；Hydrochloric acid；Glucose；Injectio；Drug incompatibility；Furaldehyde/analogs&derivatives

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.09.013

A

1009-5519（2016）09-1317-03

程永科（1981-），硕士研究生，工程师，主要从事化药新药的研发工作。

（2016-01-12）