痰培养与痰培养+痰涂片结果比较谈痰涂片的重要性

2016-11-07贺雯营口经济技术开发区中心医院辽宁营口115007

中国医疗器械信息 2016年8期

贺雯　营口经济技术开发区中心医院　（辽宁营口　115007）

贺雯营口经济技术开发区中心医院（辽宁营口115007）

内容提要：目的：通过对本院2014年1月至2015年12月间200例收住院患者的痰标本使用不同方法进行检测，强调痰涂片的重要性，并举一例说明。方法：对200例痰标本用两种方法检测，痰培养和痰培养+涂片，举例患者同时抽取静脉血做血培养。结果：通过对比，痰培养和痰培养 + 痰涂片对同一痰标本的致病菌的检出率比较差异较大。举例患者痰标本，涂片见大量酵母菌，而细菌培养的结果是肺炎克雷伯菌+++，该患者做血培养后，培养出季也蒙假丝酵母菌。结论：痰涂片中可以提供重要的信息，显著提高痰培养致病菌的检出率和正确性。所以痰培养标本应先做痰涂片。

痰培养痰涂片血培养肺炎克雷伯菌季也蒙假丝酵母菌

痰细菌培养前进行样品合格性的检查是痰细菌培养至关重要的一环，直接影响到检验结果的准确性［1］。痰标本涂片进行细胞学检查的主要是对送检标本进行质量评价，确认其是否应该进入下一步检验流程；其次，可初步判断标本性质属于感染性还是非感染性（例如单纯性未合并细菌感染的肺癌、矽肺、过敏性支气管炎、哮喘、支气管扩张等肺病的病理性痰液就属于非感染性），分析标本是否需要进行细菌培养。另外痰标本涂片进行细菌学检查的主要是通过观察有无细菌，细菌的形态特征和染色特点，细菌的数量、分布，以及各种细菌与炎症渗出的白细胞之间的相互作用（吞噬、包裹、伴行），分析判断标本中与感染相关的病原菌，将其与正常菌群或定植菌相鉴别，并根据形态特征推断其大致种类，并有助于形态特殊微生物的快速诊断，有利选择恰当的首代培养基［2］。最重要的意义是痰涂片显微镜检验对整个痰培养流程起到决定性导航作用，与次日的固体培养基上的菌落观察相结合，筛选出有意义的菌落进行下一步试验。决定痰培养报告的最终准确性和临床符合率。

此外由呼吸道感染引发菌血症或血流感染占12%，仅次于血管内装置（19%）和泌尿生殖道（17%）来源。因此，在对肺部感染患者进行下呼吸道标本检验同时，提醒临床医生应送检血培养，可以提高肺部感染病原菌诊断的正确率［3］。

1.资料与方法

1.1一般资料

1.1.1病例选择：选取本院2014年1月至2015年12月间200例收住院患者的痰标本。

1.1.2试剂和仪器：革兰氏染色液、血平板（郑州安图生物工程股份有限公司）、中国兰平板（杭州滨和微生物试剂有限公司）、血培养瓶、微生物真菌鉴定及药敏分析系统测试板（珠海美华医疗科技有限公司）、革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒32100（法国梅里埃公司）。ATB微生物鉴定药敏分析仪（购自法国梅里埃公司）、Versa Treck血培养箱、35˚C恒温培养箱。

1.2方法

1.2.1痰标本送来后，将标本分为两份，一份是立即四区划线接种血平板，中国兰平板及巧克力平板，然后放入35˚C恒温培养箱，巧克力板放烛缸中孵育。另一份即刻涂片，先涂湿片，在不染色状态下进行，将接种针前端5mm处折弯，曲成直角做成接种钩，挑取黄豆大小痰块，在载玻片上涂布开，使成2×2cm2大小的涂膜，低倍镜下观察，根据《全国临床检验操作规程》提供的标准，鳞状上皮细胞≤10个/低倍镜视野；白细胞≥25个/低倍镜视野者为合格痰标本，对于合格痰涂片，我们将它火焰固定，做革兰染色，油镜下观察细菌情况，对于不合格标本，退回与临床沟通使其重新采集标本。

1.2.2合格的痰标本，涂片后将痰标本四区划线分别接种于血平板、中国兰平板、巧克力平板，以及根据涂片情况接种其他特殊培养基。然后放于35˚C恒温培养箱，巧克力板放烛缸中孵育20h后，挑取优势致病菌落制备菌悬液，加入鉴定板，用ATB微生物鉴定仪做细菌鉴定，其他的菌则由相应方法来鉴定。

1.2.3其中举例患者同时做了两套血培养瓶，将其放入血培养箱培养，两套需氧瓶培养3d时报警，我们分别抽取瓶中培养液做了细菌涂片，革兰染色和传代培养，分别接种血平板、中国兰平板、巧克力平板和真菌培养基，温箱中培养过夜。

2.结果

2.1合格谈标本统计及举例标本镜检结果：送检痰标本大部分为合格痰标本，但也有部分被拒收重新采集的标本，统计结果见下表1。举例痰标本，低倍镜下可见上皮细胞1～4个/低倍镜视野；白细胞20～30个/低倍镜视野，油镜下可见大量酵母菌和少量革兰阴性杆菌。

2.2痰培养后结果及举例痰标本培养后结果：根据痰涂片的结果，结合平板上细菌生长情况综合判断，选取致病菌进行鉴定药敏。对于不含有致病菌的标本，48h报告阴性结果。举例标本，可见三个平板上长出粘液状融合大菌落+++，经ATB鉴定后为肺炎克雷伯菌，药敏结果全部敏感，而无酵母菌生长，与涂片的结果不符。该患者痰标本被连续送检3次，涂片和培养都是上述结果。

2.3举例标本两套血培养后结果：涂片做革兰染色，油镜下可见少量酵母菌，传代培养，几种平板上长出的也都是酵母菌，通过鉴定板鉴定为季也蒙假丝酵母菌。

2.4痰培养和痰培养+痰涂片致病菌检出情况比较：对同一个痰标本分作两份，分别使用痰培养和痰培养 + 痰涂片进行检验，结果显示痰培养 + 痰涂片具有更高的致病菌检出率，见表2。

3.讨论

3.1在细胞的代谢活动、蒸发作用、微生物降解、光学作用、化学反应、升华作用的影响下，所采集到的标本会发生一定程度的改变，从而使分析结果的准确性受到直接或间接的影响［4］。要想使送检标本的质量符合要求，必须依据下列两个原则采集标本：（1）满足临床检验结果正确性的各项要求；（2）检验结果必须真实客观地反映患者当前的病情。

3.2本研究显示不同的检验方法或方案对临床微生物检验结果存在较大的影响由举例可见，痰涂片和痰培养的结果并不一致，该患者真正的致病菌是季也蒙假丝酵母菌，而痰培养出的肺炎克雷伯菌却是定植菌。季也蒙假丝酵母菌大量出现在了痰涂片中，却没有出现在痰培养中。血培养帮助确诊了痰涂片中的酵母菌就是致病菌，临床上抗真菌治疗效果显著，可见痰涂片多么重要。

3.3造成痰涂片与痰培养的结果不一致的原因大致有以下几点：①由于痰标本在进行培养和涂片时选取部位不一致造成的；②某些快生长菌所占比例并不多，但由于其生长速度快，营养要求低，能够在培养过程中迅速变为优势菌，掩盖了其他菌的生长，造成涂片结果和培养结果不一致；③标本在采集到接种的时间过长，造成一部分苛养菌死亡，在涂片中看到的只是菌的残骸，而非活菌。

3.4如何判断痰中的致病菌：判断致病菌的方法：①合格标本的优势细菌；合格标本连续3d培养，出现两次或以上的细菌作为致病菌。②涂片和培养同时出现的细菌，并且是涂片中被吞噬细胞吞噬的细菌应考虑是致病菌。痰培养标本的取样制片过程容易产生污染和混淆，由于口咽部存在大量定植菌，咳痰标本不可避免会遭受其污染，如何判断