王婷婷，单凤玲，陆汉魁

（上海交通大学附属第六人民医院核医学科，上海200233）

免疫胶体金法定量检测促甲状腺激素的实验性能测试

王婷婷，单凤玲，陆汉魁

（上海交通大学附属第六人民医院核医学科，上海200233）

目的 免疫胶体金法用于快速检测受试者手指全血的促甲状腺素（TSH），可以定量分析且快速简便。本研究拟对免疫胶体金法定量检测TSH的精密度性能及检测仪器间是否存在差异进行实验研究。方法 设计7个不同浓度的促甲状腺激素（TSH）质控品和人血清样本，每天对各样本重复测定4次，持续5天，计算重复性（批内CV）和中间精密度（CV）。选用33份不同浓度的TSH血清标本，分别用检测仪器1和检测仪器2进行判读分析，比较两者结果的相关性。结果 质控品和病人血清TSH浓度为1.20、2.51、3.46、5.02、7.63、10.03、11.08μIU/mL，对应的批内CV分别为30.00%、17.84%、16.50%、15.00%、13.92%、10.62%、9.62%，中间精密度CV分别为 29.23%、20.19%、18.15%、16.60%、15.34%、10.42%、8.76%。二台检测仪器检测TSH值相关性r为0.968，无统计学差异。结论 免疫胶体金法定量检测TSH在低浓度TSH水平的精密度变异较大，但在中高浓度TSH尤其＞10μIU/mL情况下，检测精密性能良好。不同检测仪器间检测结果也无明显差异。

精密度； 促甲状腺激素（TSH）； 免疫胶体金法

采用免疫胶体金法定量TSH快速检测仪（immune colloidal goldquantitative TSHanalysis system）可以检测受试者手指全血的促甲状腺素（TSH）水平，该方法可定性及量化TSH检测值，操作简便，15min即可获取检测结果。目前该检测方法主要用于筛查临床及亚临床甲状腺功能减退症［1］。免疫胶体金法定量TSH快速检测属于即时检测（point-of-care testing，POCT），即是利用便携式装备直接在最接近患者居住地完成标本采集、检测和结果报告等整个流程的检验。本研究拟参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）发表的EP15-A2文件《用户对精密度和准确度性能的核实试验-批准指南》和中国国家标准化管理委员会发布的《GB/T29790-2013即时检测质量和能力的要求》文件［2-3］的相关要求验证该检测方法的精密度，同时比较二台检测仪器间是否存在明显的检测值差异。由于预试验时发现采用静脉抗凝全血的稳定性差，本研究只能采用质控品和患者的血清代替全血进行检测性能验证。

材料和方法

1 材料

（1）质控品样本：检测试剂厂家（天津新湾生物科技有限公司）提供了3种浓度TSH质控品A、B、C，分别为2.51μIU/mL、7.63μIU/mL、10.03μIU/mL。

（2）制作TSH血清样本：收集本院检验科刚完成检测的四个患者的常规血清样品，四个血清样TSH 浓度为1.20μIU/mL、3.46μIU/mL、5.02 μIU/mL、11.08μIU/mL。所有收集的样本均无溶血及无脂浊。

2 检测方法和仪器

免疫胶体金法定量TSH快速检测仪及其配套试剂盒，试剂盒批号为：1015214；共两台免疫胶体金法定量TSH快速检测仪器（检测仪器1，编号：CHR-110R00371和检测仪器 2，编号：CHR-110R00062）。均由天津新湾生物科技有限公司提供。

3 免疫胶体金法定量TSH快速检测仪检测TSH原理

免疫胶体金法定量TSH快速检测仪由PILOT-110R分析仪、测试板、智能卡（RFID Tag）、数据管理软件（版本号：V1.1.0x）、缓冲液组成。其中测试板以硝酸纤维膜作为固相载体，分别在检测区和质控区划线包被胶体金标记的TSH抗体和质控品，当待测样品滴入加样孔后，血清中的TSH与包被在聚酯膜上的胶体金标记的抗体结合，结合物随之在毛细效应下横向层析。当血清中含有 TSH抗原时，泳动到检测区时被TSH抗体捕获，形成免疫复合物，胶体金富集在检测线处形成一条可见的紫红色线。若样本中不含TSH抗原，则检测线处不发生特异性结合反应，胶体金标记物继续层析向前与包被于质控线处质控抗体结合而形成阳性条带，多余的胶体金标记物继续层析到吸水垫上。测试板的检测结果由PILOT-110R分析仪、智能卡和数据管理软件分析并经校正后得出最终结果。该方法的TSH检测范围为0.08～20.00μIU/mL。

4 验证内容

参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）发表的EP15-A2文件《用户对精密度和准确度性能的核实试验-批准指南》和POCT文件相关要求验证该检测方法的精密度性能，同时比较二台检测仪器间是否存在明显的检测值差异。

5 验证方法

5.1 建立室内质控图 本研究应用Levey-Jennings控制图（L-J控制图）［4］来建立室内质控。绘制Levey-Jennings控制图时，首先要建立基线数据。临床常规选择低浓度和高浓度的质控品做质量控制，故分别对低浓度质控A和高浓度质控C连续测定20次，获得一组数据，计算均值x和标准差s，定出质控限（TSH质控品检测结果均值的上下各两个标准差的范围，即x±2s），作为本研究的室内质量控制的基线。若试验日质控结果超出质控限，需再重新测定样本。

5.2 精密度 本研究中，用于验证的试剂盒批号没有更换。分别将TSH血清样本（浓度分别为①1.20μIU/mL、②3.46μIU/mL、③5.02μIU/mL、④11.08μIU/mL）和质控品样本（A.2.51μIU/mL、B. 7.63μIU/mL、C.10.03μIU/mL）按照CLSI EP15-A2标准［2］，连续5 d实验，每天做一批，每批4次重复测定，计算重复性（Sr）和中间精密度（SI）。计算公式为其中D是总天数，n是每日重复次数，Xdi是第d天i次重复结果，x-d是第d天所有结果的均值，Sb2是 x-d与总体均数之差的平方和。并检验所得数据是否存在离群值。

5.3 免疫胶体金法定量TSH快速检测仪两台检测仪器间的对比 收集33份不同浓度的TSH血清标本，同一份血清标本，分别用检测仪器1和检测仪器2进行分析判读结果。分析两台检测仪器的检测值之间是否存在差异。

6 统计学处理

所有数据均用Microsoft Excel2013记录并处理；用SPSS 16.0检验数据是否有离群值。

结 果

1 室内质控结果

经计算，Levey-Jennings控制图低、高浓度 x±2s的范围分别为（1.37，2.89）μIU/mL和（7.92，12.84）μIU/mL。试验日的低浓度质控A和高浓度质控C质控结果均没有超过质控图的x±2s的范围，即质控结果在可控范围内，说明试验日的验证数据可靠。见图1。

2 精密度验证结果

2.1 数据离群值检验结果 分别对7份样本5d的数据结果用箱式图进行离群值检验，结果见图2。其中，样本C有一个疑似离群值（图2中所示的圆圈），根据拉依达法判断［5］，该离群值与该组数据平均值之差的绝对值小于3倍的标准差（Sr），则不可以认为该离群值为异常值，应予保留。

经对所有数据进行计算，患者血清样本中，TSH浓度对应的批内CV以及中间精密度CV；质控品样本中，TSH浓度对应的批内CV以及中间精密度CV。见表1。Microsoft Excel2013移动平均值分析显示随着TSH浓度的升高，批内CV值和中间精密度CV均降低。见图3。

表1 TSH测定的精密度

2.3 二台免疫胶体金法定量TSH快速检测仪间的结果对比

检测仪器1和检测仪器2检测TSH结果的相关系数r为0.968，相关性好，两者差异无明显统计学意义（P＞0.01）。但是，在TSH低于5.00μIU/mL时，有5个点波动比较大（见图4中远离直线的5个点），说明在低TSH浓度时，两台检测仪器得出的结果是存在一定偏差的，这可能是因为在TSH浓度水平偏低时其CV比较大。

讨 论

本研究中的免疫胶体金法定量TSH快速检测仪是由天津新湾生物科技有限公司生产用于临床上筛查甲状腺功能减退症的仪器。本研究小组前期做了对该检测方法的临床实用性评估的研究工作［1］。

免疫胶体金法用于免疫检测中，具有以下优点：试剂和样本量少；不需γ-计数器、荧光显微镜、酶标检测仪等贵重仪器，更适合现场应用；没有诸如放射性同位素、邻苯二胺等有害物质污染环境；实验结果可以长期保存；检测时间大大缩短，提高了检测速度。尽管胶体金法存在着上述优点，但由于技术限制造成它的检测灵敏度低，因此本研究没有验证该方法的检测灵敏度。因为该方法是全血测量，全血的TSH标准非常难以建立，因此我们简化以精密度进行验证，没有评估其准确度。

为了探讨其精密度性能是否符合临床应用的要求，参考CLSIEP15-A2文件和POCT文件的相关要求验证免疫胶体金法定量TSH快速检测仪的精密度性能，同时对免疫胶体金法定量TSH快速检测仪进行了检测仪器间对比。

该检测方法实际临床应用中，测定TSH的样本是采集的受试者指尖血即全血检测，在验证该检测方法精密度性能时，取全血样本不便且不易储存、影响全血稳定性的因素较多，故本研究采用血清样本及质控品来验证其精密度，对验证该检测方法的稳定性影响不大。考虑到正常参考区间上下限左右处以及医学决定水平处的精密度性能，本研究选择7个浓度水平进行评价，包括了该检测方法示值范围的浓度和医学决定水平处的浓度。考虑到基质效应及样本稳定性，同时检测了新鲜患者标本与质控标本。

通过建立室内质控，确保验证结果可靠。通过精密度验证发现，该方法在不同的TSH浓度范围内，其精密度性能有波动，呈负相关性变化，在TSH低浓度水平时重复性和中间精密度变异比较大，在中高浓度时性能良好。图2可以看到，随着TSH浓度的升高，批内精密度和中间精密度逐渐降低，尤其当TSH浓度超过10.00μIU/mL时，批内CV和中间CV均明显的降低。临床上当TSH超过 10.00μIU/mL同时伴有FT3和FT4升高［6］，诊断为临床甲状腺功能减退症。根据TSH浓度与精密度的关系可以推断，该方法应用于临床筛查甲状腺功能减退症时，当受另外，CLSIEP文件是目前最为规范的检验方法或检测系统分析性能评价工具，涉及精密度的有EP5-A2，EP10-A2和EP15-A2［7］。其中EP15-A2是针对临床实验室而设计，试验和统计过程均较简单，主要用于验证确认检验方法或检测系统的精密度性能。应用EP15-A2文件评价其精密度性能简便实用，在满足质量管理要求的同时，费用也较低廉。

检者全血中TSH浓度处于低浓度水平时，因该检测法在低浓度时性能不够稳定，需谨慎对待检测结果，不可以此来判断受检者的TSH水平；当受检者全血中TSH在正常值上限和10.00μIU/mL之间时，检测结果比较稳定，可以建议受检者去专科医院进行甲状腺功能的检查；当受检者全血中TSH值在10.00μIU/mL以上时，检测结果是比较可靠的，特别当受检者有畏寒、乏力、手足肿胀感、嗜睡、记忆力减退、少汗、关节疼痛、体重增加、便秘、女性有月经紊乱或者月经过多、不孕等典型临床甲减的症状和体征时，要建议其去专科医院进行详细的甲状腺功能检查。因此，该方法在筛查临床甲状腺功能减退症中结果是可以接受的。免疫胶体金定量TSH快速检测仪二台检测仪器（检测仪器1和检测仪器2）的检测结果无显著差异，说明，该方法在同一检测系统不同检测仪器检测结果是可靠的，符合POCT产品的临床应用要求。

免疫胶体金法定量TSH快速检测仪应用于临床上筛查甲状腺功能减退症时在低TSH浓度水平的检测结果需要谨慎对待，在高TSH浓度水平，尤其大于10.00μIU/mL且有临床症状和体征的临床甲状腺功能减退症的人群时，结果是可靠的。同时，使用者需了解该方法的特点及优缺点，结合其他临床检查及方法做到合理应用。

［1］Wang T T，Lu H K，Ruan M F.Evaluation on clinical utility of immune colloidal gold method for rapid qualitative and quantitative test of thyroid stimulating hormone.Abstract presented at the 11thAsia Oceania Thyroid Association Congress（AOTA），Kochi Kerala India，September 25-28，2014.61.

［2］Clinical and Laboratory Standards Institute.User demonstration of performance for precision and accuracy EP15-A2.Wayne，USA. CLSI，2004.

［3］GB/T29790-2013.即时检测质量和能力的要求.北京：中国标准出版社，2014.

［4］Levey S，Jennings E R.The use of control charts in the clinical laboratory.Am JClin Pathol，1950，20：1059-1066.

［5］赵辉，邵素华，谢东坡.分析数据中离群值的处理方法.周口师范学院学报，2004，05：70-71，115.

［6］Cooper D S，Doherty GM，Haugen B R，et al.Management guidelines for patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer. Thyroid，2006，16（2）：109-114.

［7］杨有业，张秀明.临床检验方法学评价.北京：人民卫生出版社，2008.126.

（潘子昂编辑）

Performance Assessment of Quantitative Thyroid Stimulating Hormone by Immune Colloidal Gold Assay

WANG Ting-ting，SHAN Feng-ling，LU Han-kui
（Department of Nuclear Medicine，Sixth People's Hospital Affiliated Shanghai Jiaotong University，Shanghai200233，China）

Objective Immune colloidal gold（ICG）assay has been applied for detecting of thyroid stimulating hormone（TSH）using finger blood.The aim of the study is to evaluate the precision and manufacture error between different instruments on ICG quantitative TSH analysis.M ethods Seven TSH samples w ith different concentration were chosen for the study.Each samplewas tested 4 times intraassay every day and lasted for 5 days.The intraassay and intermediate CV（%）were calculated.In addition，33 blood samples w ith different TSH concentrationswere tested by two ICG instruments to check their differences.Results The intraassay and intermediate CV（%）were 30.00%，17.84%，6.50%，15.00%，13.92%，10.62%，9.62%and 29.23%，20.19%，18.15%，16.60%，15.34%，10.42%，8.76%for TSH samples w ith concentration 1.20，2.51，3.46，5.02，7.63，10.03，11.08μIU/m L，respectively.Between two ICG instruments，the correlation coefficientwas 0.968 and there was no significant difference.Conclusion The precision performance of ICG TSH assay was less stable at low TSH concentration；when TSH≥10.00μIU/m L the precision performance was satisfactory.No difference was found between two ICG TSH instruments.

Precision； Thyroid stimulating hormone； Immune colloidal gold

10.11748/bjm y.issn.1006-1703.2016.05.026

2015-07-21；

2015-08-21