陈晨辉，赵自叶，徐进，曹雪松，郭尚敬，李军，王皓，侯盛



重组人心房利钠肽(ANP) 的原核表达、纯化及鉴定

陈晨辉1,4*，赵自叶2,6*，徐进4,6，曹雪松2,6，郭尚敬3,6，李军3,6，王皓5,6，侯盛5,6

1 同济大学生命科学与技术学院，上海 200092 2 聊城大学生命科学学院，山东聊城 252000 3 聊城大学药学院，山东聊城252000 4 上海张江生物技术有限公司，上海 201203 5 第二军医大学肿瘤研究所，上海 200433 6 抗体药物与靶向治疗国家重点实验室，上海 201203

为提高重组人心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide，ANP) 的表达量，将3个ANP通过赖氨酸 (Lysine，K) 串联，并构建相对应的重组表达载体pET28a(+)/ANP3。转染大肠杆菌进行诱导表达，目的蛋白约占菌体总蛋白的60%。经过包涵体变复性，赖氨酸酶 (Lys-C) 和羧肽酶 (CPB) 水解，以及一系列层析纯化，每升培养液可获得约16 mg的ANP蛋白。最终，纯化后的ANP经UPLC及Tricine SDS-PAGE鉴定，纯度大于90%，LC-MS鉴定显示其分子量为3 080 Da，且为二硫键正确形成的ANP单体，通过ELISA试剂盒检测，其具有和参比品一致活性。本研究为ANP的大规模制备打下了基础。同时，所采用的串联表达技术也为其他多肽类药物的重组表达提供了新的思路。

心房利钠肽，串联表达，多肽纯化

人心房利钠肽 (ANP) 是由人心房肌细胞分泌的一种小肽激素，由28个氨基酸组成，其中的17个氨基酸通过一对二硫键连接形成闭合环，而氨基端和羧基端分别有6个和5个氨基酸组成的短链 (图1)。研究表明，ANP具有舒张血管、降低血压、增加血管通透性以及利钠、利尿等作用[1]，并能对抗肾素-血管紧张-醛固酮系统，在调节心血管系统[2-4]和盐水代谢平衡中也发挥着重要的作用[5-6]。……