廖忠意（贵州警官职业学院 司法鉴定中心，贵州 贵阳 550005）

对腐败血液DNA三种提取方法的比较

廖忠意（贵州警官职业学院 司法鉴定中心，贵州 贵阳 550005）

对新鲜的血液或者血痕，采用直接扩增和chelex-100直接处理提取DNA，一般都能获得完整、均衡的DNA分型，但在日常检案过程中，陈旧血痕、载体潮湿、委托方送检的样本由于保存不当导致血液和少量血痕检材腐败的情况也比较常见。这类检材DNA采用普通的chelex-100直接提取很难获得比较完整的DNA分型。结合一列检案，分别用chelex-100、磁珠法、微量DNA提取试剂盒三种方法专门针对腐败血液进行比较分析。

chelex-100；磁珠法；微量DNA提取试剂盒；纯化柱

一、材料与方法

（一）材料

取自本实验室检验的亲子鉴定一案例中腐败血液一份。

（二）主要仪器与试剂

9700型PCR扩增仪（美国ABI公司），3500遗传分析仪（美国ABI公司），案件专用磁珠法DNA提取试剂盒（长春市博坤生物科技有限公司），Simgen微量DNA提取试剂盒（杭州新景生物试剂开发有限公司），Goldeneye20A试剂盒（北京基点认知技术有限公司）。

（三）DNA提取

1. chelex-100

分别取100μL、200μL血液置0.5ml离心管中，加入300μL超纯水浸泡10min，适当振荡；13000rpm离心3min，去上清液，用超纯水重复洗涤2次，最后仅剩50μL液体。剩余液体中加入chelex-100100μL、蛋白酶K10μL，56℃育2h，适当振荡，100℃8min，13000rpm离心3min，上清用于PCR扩增和检验。

2. 磁珠法

分别取100μL、200μL血液置1.5ml离心管中，加入300μL超纯水浸泡10min，适当振荡，13000rpm离心3min，去上清液，用超纯水重复洗涤2次，最后仅剩50μL液体。剩余液体中加入150μL裂解液，漩涡振荡混匀后，95℃温育30min后漩涡振荡混匀，加入10μL磁珠，漩涡振荡混匀，室温吸附10min，吸附后液体漩涡振……