李谢晟（高二学生，项目研究者）张四槐（项目指导教师）

耐超高温α-淀粉酶的研制

对射线处理后的地衣芽孢杆菌进行筛选，获得一株能耐100℃高温的菌株。对菌株产生的酶进行酶学性质研究表明，该酶在100℃下，酶活力是27500u/mL，耐高温性和酶活力指标均超过国家标准。进行产酶发酵中试和超滤、盐析提取实验，结果是超滤法比盐析法回收率高12.5%，酶的比活力高45.9%，成本低20%。酶制剂在酶活力、热稳定性优于国家优等品标准，具有实用价值。

下文介绍该项目研制的过程。

一、材料与方法

（一）实验材料和药品

1.菌株

地衣芽孢杆菌（B.licheniformis），由湖南农大提供。

2.培养［1］

（1）琼脂平板培养基。培养基配方∶胰蛋白胨1.5g，酵母膏0.7g，NaCl1.0g，琼脂2.0g，可溶性淀粉1.0g，pH值7.0，其余为水，合计总重100g。上述100g配料混匀后分放于培养皿，0.1MPa灭菌30-35min，冷却到室温，制成琼脂复壮培养基备用。

（2）基础培养基。不加琼脂，其他与琼脂平板培养基相同。

（3）筛选培养基：在基础培养基上加入2%琼脂和0.01%曲利本蓝。

（4）扩大培养基配方：胰蛋白胨1.0-1.5%，酵母膏0.5-0.7%，NaCl0.9-1.1%，可溶性淀粉1%，pH值6.5-7.0，其余为水，合计总重5kg，0.1MPa灭菌30-35min，冷却到40℃，制成扩大培养基，备用。

（5）液态发酵培养基配方：（NH4）2SO40.22-0.27%，KH2PO40.30-0.37%，CaCl20.015-0.02%，可溶性淀粉0.25-0.30%，胰蛋白胨0.35-0.45%，玉米粉2.9-3.5%，pH值6.5-7.0，其余为水，合计总重50kg，0.1MPa灭菌30-35min，冷却到40℃，制成液态发酵培养基，备用。

3.主要试剂、材料

硅藻土，原碘液，稀碘液［2］，磺化聚砜∶超微滤膜（型号YM-200），20g/L可溶性淀粉溶液，磷酸缓冲液，NaOH溶液（0.5mol/L），盐酸溶液（0.1mol/L）。曲利本蓝。

4.主要仪器

板框压滤机，Unic7200型可见分光光度计，PL303型电子天平，HH-6型恒温水浴锅，电子万用炉，PHS-3C型pH计，离心机，XK96-B型快速混匀器，高压消毒器，超净工作台，培养箱，恒温箱。……