郑夏生，赖智填，成金乐

(国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室 中山市中智药业集团有限公司，广东 中山 528437)

DNA条形码在中药破壁饮片物种鉴定的应用

郑夏生，赖智填，成金乐*

(国家中医药管理局中药破壁饮片技术与应用重点研究室 中山市中智药业集团有限公司，广东 中山528437)

目的：建立中药破壁饮片的DNA条形码鉴定方法。方法：通过提取15个品种的中药破壁饮片的基因组DNA，并利用DNA条形码鉴定技术中的ITS2和psbA-trnH两个片段进行物种鉴定。结果：ITS2可以成功地对这15个品种进行鉴定；psbA-trnH也可对大部分的样品进行鉴定。结论：说明DNA条形码技术在中药破壁饮片的物种鉴定上可以得到很好的应用；同时也验证了以ITS2为主，psbA-trnH为辅助的药用植物DNA条形码鉴定思路的正确性和可行性。另外，psbA-trnH的数据库也可能存在不足，需补充完善更全面的物种序列信息，以供日后的物种鉴定提供更全面的基因模板信息作为参考和对照。

破壁饮片；物种鉴定；DNA条形码；ITS2；psbA-trnH

中药破壁饮片是通过现代粉碎技术将传统中药饮片加工至D90< 45 μm(300目以上)的破壁粉末，进而通过无固体添加成型技术制成的30～100目的干燥颗粒状饮片[1]。药材经过细胞破壁处理后，其中所含的有效物质获得更好的溶出[2-3]，加上生产过程中无高温提取，可以有效避免有效物质的变性。但与此同时，破壁后的药材失去了绝大多数的显微特征，增加了其物种鉴定的难度。DNA条形码为中药破壁饮片的物种鉴定提供了很好的解决方案。

DNA条形码是近年来发展迅速的可用于动植物物种快速鉴定的技术[4]。该技术系通过基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列来进行物种鉴定，具有快速、准确、重复性高等优点[5-8]。陈士林课题组对6000余份药用植物样本进行DNA条形码序列筛选，提出以ITS2(Internal Transcribed Spacer 2)作为药用植物标准DNA条形码[9]，以psbA-trnH作为辅助的药用植物鉴定技术的思路[10]；并创建了“中草药DNA条形码生物鉴定体系”，实现中药资源信息检索、查询以及基因序列的比对鉴定，从基因水平解决中药材与混伪品的物种识别问题。……