张　伟,姬明丽,郭前进,千智斌

(新乡医学院 基础医学院,河南 新乡　453003)



红鳍东方鲀SREBP-1和SREBP-2基因克隆及表达分析

张伟,姬明丽,郭前进,千智斌

(新乡医学院 基础医学院,河南 新乡453003)

为了研究红鳍东方鲀SREBP-1和SREBP-2基因的功能及在脂肪代谢中的分子机制,从红鳍东方鲀脂肪组织提取总RNA,反转录获得cDNA模板,利用设计的引物PCR扩增获得SREBP-1和SREBP-2开放阅读框(ORF),SREBP-1基因ORF区的cDNA序列长度为3 330 bp,编码1 109个氨基酸,SREBP-2基因ORF区的cDNA序列为3 444 bp,编码1 147个氨基酸。实时荧光定量PCR检测SREBP-1基因在红鳍东方鲀不同组织中的表达特征,结果表明,SREBP-1在脑组织中表达丰度最高,其次为眼、脂肪组织、肠、鳃、脾脏、心脏及肝脏,在肌肉中表达丰度最低。将SREBP-1连接到原核表达载体pET32a上,利用IPTG对重组质粒pET32a-SREBP-1在大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳显示在141 kDa处有特异性的条带出现。

红鳍东方鲀;SREBP-1基因;SREBP-2 基因;原核表达

固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是一类含有碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链(bHLH-zip),参与调控脂肪酸、胆固醇和甘油三酯合成与吸收的重要转录因子,对脂质稳态维持起着重要的作用[1]。SREBPs家族包含SREBP-1和SREBP-2这2个基因,分别位于17,22号染色体上[2]。SREBP-1基因因各自不同启动子的选择性剪切形成2个剪切体,分别为SREBP-1a和SREBP-1c,两者的氨基酸序列长度不同,SREBP-1c的序列较长。SREBP-2 基因定位于22号染色体,其结构上有一段较长酸性激活域[3],并与SREBP-1a酸性激活域的结构较为相似。Hua等[4]研究发现,SREBP-1和SREBP-2蛋白的结构较为相近,有40%～50%的同源性,物种间也有差异。SREBP-1c是调节脂肪代谢的重要核内转录因子,其主要在肝细胞和脂肪细胞中表达,同时在脂肪细胞分化中有着至关重要的作用[5]。……