林丽萍，陈丽娜，徐超，朱亚丽，马启超，王红霞

匹多莫德口服液对二期梅毒外周血调节性T淋巴细胞和Th1/Th2细胞因子的影响

林丽萍，陈丽娜，徐超，朱亚丽，马启超，王红霞

目的探讨匹多莫德口服液对二期梅毒外周血调节性T淋巴细胞和Th1/Th2细胞因子的影响。方法将80例二期梅毒患者分为观察组与对照组，各40例，流式细胞仪检测治疗前和治疗3个月后的外周血 CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞，ELISA检测外周血IL-2、IFN-、IL-4及IL-10细胞因子，ELISA检测治疗3个月后梅毒血清TRUST滴度并加以疗效分析。结果治疗3个月后观察组患者IL-2、IFN-明显高于对照组，CD4+CD25+FOXP3+、IL-4、IL-10明显低于对照组，两组差异均有统计学意义（均＜0.05）；治疗3个月后观察组患者有效率明显高于对照组，差异有统计学意义（＜0.05）。结论匹多莫德口服液可通过下调CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞和改善Th1/Th2细胞因子的平衡而辅助治疗二期梅毒。

梅毒；匹多莫德；T淋巴细胞；细胞因子

梅毒为我国目前主要的性传播疾病之一。近年来，其发病率呈显著上升趋势[1]，经驱梅治疗后，有少数患者血清反应素转阴较慢或不阴转，超过2年血清反应素抗体不转阴者称为血清固定。一旦血清固定，临床治疗相当困难，梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）持续阳性或经久不愈，常给患者造成很大的心理压力。如何有效的治疗，以减少梅毒血清固定的发生，已成为梅毒患者治疗面临的重大课题。有研究表明梅毒血清固定患者细胞免疫功能低下，血清机体细胞免疫受到抑制是梅毒发生的重要因素[2]。本研究选取免疫调节剂匹多莫德口服液辅助治疗二期梅毒，并于治疗前后检测观察调节性T淋巴细胞CD4+CD25+FOXP3+、Th1型细胞因子（IL-2、IFN-）及Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）的变化，以探讨匹多莫德口服液免疫调节作用对早期梅毒治疗的疗效及免疫的影响。现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料入选标准：（1）所有病例按照国家卫生部制定的WS273-2007《梅毒诊断标准》[3]确诊的二期显性梅毒患者；有明确病史及典型二期梅毒临床表现，梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）均阳性，TRUST：1∶8～64，均来自宁波市鄞州第二医院皮肤科2012年1月至2014年12月的门诊患者；（2）所有病例HIV抗体检测阴性，近半年未接受卡介菌多糖核酸针、白介素、转移因子等免疫调节剂的治疗，无自身免疫性疾病、过敏性疾病及严重系统性疾病。收集符合上述标准的患者80例，所有病例按简单随机法分为观察组与对照组，各40例。入组前均未进行过驱梅治疗，所有入选者均对本研究知情同意。观察组男25例，女15例；年龄18～50岁，平均（35±11）岁。对照组男23例，女17例；年龄20～51岁，平均（34±9）岁。两组一般资料差异无统计学意义（＞0.05）。

1.2方法

1.2.1治疗方法所有病例均按卫生部推荐的方案进行驱梅毒治疗，即苄星青霉素240万单位，分两侧臀部肌肉注射，每周1次，共3次。为避免吉-海氏反应，滴度大于1∶16的，第一次驱梅治疗前3 d开始口服泼尼松，每次10 mg，2次/d，共4 d。对照组驱梅治疗后不作其它治疗，观察组驱梅治疗同时口服匹多莫德口服液，每次0.4 g，2次/d，共3个月。

1.2.2标本采集两组分别于治疗前和开始治疗3个月后抽取外周血，进行外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子检测，驱梅治疗前抽血检测TRUST，驱梅治疗后按常规进行血监测TRUST滴度随访，选取治疗3个月后进行疗效判断。

1.2.3CD4+CD25+FOXP3+的检测首先抽取空腹静脉血8ml，EDTA-K2抗凝，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞（PBMC），PBS洗涤1次；然后用200 l PBS重悬并调节PBMC浓度为1×106/ml，取100 l细胞悬液，加入相应荧光素标记的抗体：PC7-CD3 10 l，PC5-CD4、APCCD25各20 l，混匀室温避光孵育10min；再将上述标记细胞用预冷PBS1500r/min离心洗涤4 min，弃上清，重悬后加1 ml固定液4℃固定60min，加2ml破膜液洗涤2次，加FITC-FOXP3抗体20 l，4℃避光孵育30 min，加2 ml破膜液洗涤1次，用300 l PBS重悬，上机检测。

1.2.4IL-2、IFN-、IL-4及IL-10的检测采取空腹静脉血8ml，离心取上清，采用E LISA方法测定Th1型细胞因子IL-2、IFN-和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的水平。

1.2.5疗效判断标准痊愈：临床症状或体征全部消失，血清TRUST转阴；有效：TRUST下降2个或2个以上滴度；无效：TRUST下降不到2个滴度；痊愈+有效=总有效。

1.3统计方法采用SPSS13.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差表示，采用 检验；计数资料以率表示，采用2检验。＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组治疗后Th1/Th2各细胞因子指标比较治疗3个月后观察组患者IL-2、IFN-明显高于对照组，差异均有统计学意义（=17.84、10.90，均＜0.05）；治疗3个月后观察组患者IL-4、IL-10明显低于对照组，差异均有统计学意义（=18.91、12.69，均＜0.05）。见表1。

2.2两组调节性T淋巴细胞指标比较治疗前观察组和对照组的CD4+CD25+FOXP3+细胞分别为（8.13±2.78）%（、7.95±3.16）%；治疗后观察组和对照组的CD4+CD25+FOXP3+细胞分别为（6.19±2.94）%、（8.09±3.34）%；治疗3个月后观察组患者CD4+CD25+FOXP3+细胞比例较对照组明显下降，差异有统计学意义（=17.98，＜0.05）。

2.3两组临床效果比较治疗3个月后观察组患者有效率明显高于对照组，差异有统计学意义（2=5.591，＜0.05）。见表2。

3　讨论

梅毒是由苍白螺旋体引起的性传染性疾病，医学界普遍认为细胞免疫是清除体内Tp的主要方式，其中又以T细胞介导的细胞免疫为主。T细胞可分为CD4+T细胞和CD8+T细胞两个亚群，CD4+细胞亚群主要是辅助性T细胞，它可分化为Th1、Th2细胞，Th1淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-及IL-12等，主要介导细胞免疫，在机体抗梅毒螺旋体感染的免疫应答过程中发挥着重大作用；而Th2淋巴细胞分泌细胞因子IL-4、IL-6和IL-10等，主要介导体液免疫。研究发现，早期梅毒患者体内以 Th1型细胞因子为主，随病程的进展，出现Th1向Th2漂移[4]

CD4+CD25+调节性 T细胞是一类具有独特免疫抑制功能的T细胞亚群，具有免疫抑制的特性，并同时表达CD25和转录因子Foxp3，在感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病的发生、发展中起着重要作用。有研究认为 CD4+CD25+调节性T细胞水平的增多可抑制自身免疫性疾病的发生，并能导致感染扩散并造成感染后的血清抗体持续阳性表达而无法清除[5]。

国内外多项研究显示[6-7]，早期梅毒患者存在细胞免疫抑制及免疫功能失衡，这种免疫失衡或免疫抑制影响到了梅毒患者治疗的转归，梅毒治疗后，转归有治愈、血清固定及梅毒复发。血清固定是临床治疗的难点，其机制尚不十分明确，已有学者研究认为，梅毒血清固定与Th1/Th2型细胞失衡及调节性T细胞表达异常等有关[8-9]，梅毒的血清固定多发生在早期梅毒患者，有文献报导二期梅毒有17%的固定率[10]，如何提高梅毒的治疗效果，减少血清固定的发生，已成为临床治疗亟待解决的一大难题。研究认为机体免疫异常时梅毒的抗生素治疗并不能达到预期效果[11]。匹多莫德是一种全新结构的免疫调节剂，能刺激非特异性自然免疫及细胞免疫，促进IL-2、INF-的产生，使TH/ TS正常化[12]。本研究结果显示：治疗后3个月观察组患者IL-2、IFN-明显高于对照组；CD4+CD25+FoxP3、IL-4、IL-10明显低于对照组；患者有效率明显高于对照组；差异均有统计学意义（均＜0.05)。实验表明匹多莫德可通过纠正梅毒患者Th1/Th2细胞的平衡及下调调节性T细胞而发挥其免疫调节作用，从而提高患者的细胞免疫水平，增强临床治疗效果。但本研究因随访时间不够长，尚缺乏降低梅毒血清固定率的统计学支持，其实际治疗效果仍有待于进一步观察和研究。

表1　两组治疗前后Th1/Th2各细胞因子水平比较　pg/ml

表2　两组治疗3个月后有效率比较例（%）

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.05.057

R759.1

A

1671-0800(2016)05-0671-02

2015-12-27

（本文编辑：陈志翔）

315000宁波，宁波市鄞州第二医院

林丽萍，Email：yzeyllp@ 163.com