唐雨薇，刘丽萍，王若娴，陈宇宏，刘仲华，2，3，刘硕谦，2，3*

1.湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128；2.国家植物功能成分利用工程技术研究中心，湖南 长沙 410128；3.教育部茶学重点实验室，湖南 长沙 410128

茶树咖啡碱合成酶CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建

唐雨薇1，3，刘丽萍1，3，王若娴1，陈宇宏1，刘仲华1，2，3，刘硕谦1，2，3*

1.湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128；2.国家植物功能成分利用工程技术研究中心，湖南 长沙 410128；3.教育部茶学重点实验室，湖南 长沙 410128

CRISPR/Cas9技术是一门新兴的基因组定点编辑技术，具有操作简单、高效的优点，可轻松实现对目标基因的敲除、替换和定点突变等操作。该技术刚诞生，就受到了全球生命科学领域研究者的关注，不到 3年的时间就已经成功应用于多种动、植物当中。然而 CRISPR/Cas9技术在茶树中的应用面临载体构建问题，本文以茶树咖啡碱合成酶为例，联合采用常规PCR、Overlapping PCR和Golden Gate Cloning技术，构建了包含茶树咖啡碱合成酶双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体，为CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶树中的应用奠定了坚实基础。

茶树；基因组编辑技术；咖啡碱合成酶；CRISPR/Cas9技术

虽然我国一直非常重视茶树的品种改良工作，但由于茶树具有生长周期长、自交不亲和的特性，使得采用常规育种技术难以实现茶树育种工作取得突破性进展。近年来分子育种及基因工程等现代分子生物学技术在水稻、西红柿、马铃薯等农作物品种改良中发挥了重要作用，也为茶树育种提供了新的途径。因而，茶树分子生物学研究成了茶叶科学中最活跃和进展最快的领域。……