陈竞红，常志伟，贾永旭，秦艳茹

郑州大学第一附属医院肿瘤科 郑州 450052



AZIN1慢病毒的制备及EC109稳定感染细胞株的建立*

陈竞红，常志伟，贾永旭，秦艳茹#

郑州大学第一附属医院肿瘤科 郑州 450052

AZIN1基因；RNA编辑；慢病毒；EC109细胞

目的：制备野生型和编辑型AZIN1的慢病毒并建立稳定感染的食管癌EC109细胞株。方法：用RT-PCR法从人食管鳞状细胞癌组织中扩增出AZIN1基因的cDNA序列，选取测序结果中目标位点的A峰与G峰均高且与NCBI公布的基因编码序列一致的PCR产物，克隆至慢病毒表达载体pLenti6/V5-D-TOPO，构建野生型和编辑型AZIN1的重组慢病毒表达载体，经酶切和测序鉴定后，经293FT细胞包装，制备相应的慢病毒，然后感染EC109细胞株，行RT-PCR、测序和Western blot鉴定稳定感染的EC109细胞株。结果：双酶切重组慢病毒表达载体后产生了1 347 bp和6 915 bp的片段，经测序证实1 347 bp片段为正确的AZIN1基因编码序列；RT-PCR、测序和Western blot结果证实成功建立了稳定感染的EC109细胞株。结论：成功制备了野生型和编辑型AZIN1的慢病毒并建立了稳定感染的EC109细胞株。

RNA编辑泛指对RNA分子在转录后进行再加工和修饰的过程，能使基因编码的遗传信息在RNA水平上进一步产生多样性与可塑性，可能导致肿瘤特异性的“编辑/表观遗传突变”。研究[1]发现食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)中存在RNA腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA, ADAR)过表达并介导编码抗酶抑制剂1(antizyme inhibitor 1, AZIN1)RNA(A→I)过度编辑，这种编辑型AZIN1作为一种获得性功能表型有可能与食管鳞癌的发生发展有关。作者制备了重组野生型和编辑型AZIN1慢病毒，并建立了稳定感染野生型AZIN1和编辑型AZIN1的EC109细胞株，为进一步研究编辑型AZIN1在食管鳞癌中的作用机制和生物学功能奠定了基础。……