刘圆，王丽鸳，韦康，成浩，张芬，吴立赟，胡娟



不同氮处理茶树实时定量PCR内参基因筛选和验证

刘圆，王丽鸳*，韦康，成浩*，张芬，吴立赟，胡娟

中国农业科学院茶叶研究所 国家茶树改良中心，浙江 杭州 310008

为筛选不同氮处理下茶树（）实时荧光定量PCR（qRT-PCR）试验体系中最佳内参基因，以茶树幼叶、成熟叶和幼根为材料，应用qRT-PCR分析、、、、-tubulin、等6个内参基因在不同氮浓度和氮源处理下的表达变化，借助GeNorm和NormFinder程序对候选内参基因稳定性进行评价。结果表明，在不同氮浓度和氮源处理下，、-actin和表达稳定性较好，+组合稳定性最佳，可用作茶树基因表达研究的内参基因；而-tubulin和表达稳定性较差，不适合做内参基因。为进一步证实上述结果，分别以、-tubulin 、+组合为内参基因，分析茶树幼叶中硝酸根转运蛋白基因（）和铵根转运蛋白基因（）的表达水平，发现以和+组合为内参基因时，目的基因的相对表达量随处理时间延长变化规律基本一致；而以-tubulin为内参基因时，目的基因的变化规律与前两者存在明显差别。因此，根据特定试验体系选择合适的内参基因对于qRT-PCR定量结果的准确性和可靠性具有重要意义。

茶树；内参基因；氮处理；qRT-PCR

实时荧光定量PCR（Quantitative real-time reverse-transcriptase PCR, qRT-PCR）因其定量准确、灵敏度高、重复性好、高通量等特点已广泛应用于基因表达水平检测[1-3]。在qRT-PCR相对定量检测中，为避免不同样品在RNA质量、逆转录效率和PCR反应条件上可能存在的差异，通常选择相应的内参基因进行校正和标准化[4-5]。然而，近年来的研究表明，在不同组织、器官、发育时期和不同试验条件下都稳定表达的内参基因并不存在[6-7]，因此，根据特定试验体系选择稳定表达的内参基因，已成为qRT-PCR结果准确可靠的重要前提。……