刘芳平　郑素芳　罗庆丰　高　文　饶华民



HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中表达的临床意义

刘芳平郑素芳罗庆丰高文饶华民

目的分析HELQ 蛋白表达与原发性肝细胞性肝癌临床病理特征和预后的关系。方法收集71例原发性肝细胞性肝癌，应用免疫组化技术检测HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中的表达情况。结果HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中的阳性表达率为30.99%，HELQ蛋白阳性表达与原发性肝细胞性肝癌患者的肿瘤大小、卫星灶、肿瘤Edmonson-steiner分级、血清AFP水平、TNM分期有显著相关性，HELQ蛋白阳性表达与原发性肝细胞性肝癌患者的性别、年龄、包膜受侵、门静脉癌栓脉和脉管浸润无显著相关性。结论HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中表达水平下降，HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中发挥抑癌基因的作用。

原发性肝细胞性肝癌；HELQ蛋白；抑癌基因

(The Practical Journal of Cancer,2016,31:1222～1224)

我国为原发性肝细胞性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，HCC，简称肝癌)高发地区，原发性肝细胞性肝癌高侵袭性和高增殖活性是导致原发性肝细胞癌导致较高死亡率的原因之一，同时肝内播散及多中心发生，及其癌细胞转移过程都需借助于其细胞表面的活性分子相互作用。研究表明HELQ基因可帮助修复细胞增殖时DNA复制过程中所发生的所有的DNA损伤,如果这一基因缺失或发生缺陷，DNA错误就有可能增加，从而提高了癌症形成的机会[1]。本研究通过检测HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中的表达情况，并分析原发性肝细胞性肝癌患者的临床病理特征和HELQ蛋白表达的相关性，探讨HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌发生发展中的作用机制。

1　材料与方法

1.1一般资料

收集江西省肿瘤医院收治的原发性肝细胞性肝癌患者单纯手术切除的癌组织标本71例，年龄32～72岁，平均(45.0±4.5)岁，男性65例，女性6例。所有患者术前均未接受放射治疗、化学治疗及射频消融治疗，术后肿瘤组织标本经病理检查诊断为原发性肝细胞性肝癌。

1.2方法

兔抗人HELQ蛋白多克隆抗体免疫组化试剂盒购自(美国Novus biologicals公司)。对原发性肝细胞性肝癌的组织石蜡块进行4 μm连续切片，经过二甲苯脱蜡后，过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，构橼酸盐缓冲液(PH=6.0)进行热抗原修复，滴加 HELQ蛋白抗体(滴度为1∶300)于标本玻片上，置于湿盒内4 ℃冰箱过夜。复温至室温，PBS洗去多余的HELQ蛋白抗体，滴加Maxvision二抗试剂，湿盒内室温孵育1 h；以磷酸盐缓冲液(PBS)替代抗体为阴性对照。DAB光镜下监控显色，出现淡黄色颗粒时终止显色，苏木精复染，封片。显微镜下观察及其分析记录实验结果。结果采用免疫组化半定量法[2]，用染色强度联合阳性细胞百分比进行评分：染色强度分为：0分，阴性；1分，弱阳性；2分，中度；3分，强阳性；阳性细胞百分比分级：阳性细胞0%，0分；0%～25%，1分；25%～50%，2分；50%～75%，3分；>75%，4分。染色强度和阳性细胞百分比评分分为4个等级：0分为阴性，1～3分为+，4～8分为++，9～12分为+++。

1.3统计学处理

应用SPSS 16.0统计软件进行分析，采用χ2检验分析HELQ蛋白表达与原发性肝细胞性肝癌临床病理特征之间的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中阳性表达率为30.99%，HELQ蛋白阳性表达与原发性肝细胞性肝癌患者的肿瘤大小、卫星灶、肿瘤Edmonson-steiner分级、血清AFP水平、TNM分期具有显著相关性(P<0.05)，HELQ蛋白阳性表达与原发性肝细胞性肝癌患者的性别、年龄、包膜受侵、门静脉癌栓脉和脉管浸润无显著相关性(P>0.05)，见表1。

3　讨论

我国为原发性肝细胞性肝癌高发地区，无论是原发性肝细胞性肝癌发生、发展还是转移和复发的防治均是当前研究的热点和重点，研究表明原发性肝细胞性肝癌发生发展过程都需借助于其细胞核内的活性分子之间的一系列相互作用，促进肿瘤细胞的增殖，调节肿瘤的生长。本究通过检测原发性肝细胞性肝癌肿瘤组织HELQ蛋白表达和其临床病理参数关系，探索HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌表达临床意义，探索HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌的诊断和预测预后中临床价值。

HELQ因子是近年来发现的1种多功能DNA解螺旋酶，能催化双链DNA沿3-5’方向解螺旋功能酶，在DNA损伤修复及维护基因组稳定性中起着重要作用,HELQ(又名Hel308)是1种核因子，其基因定位于4q21，蛋白质相对分子量为124.5 kDa，由1101个氨基酸构成[3-4]。HELQ因子可帮助修复细胞增殖时DNA复制过程中所发生的所有的DNA损伤，维持肝细胞稳定。如果这一基因缺失或发生缺陷，DNA错误就有可能增加，从而提高了癌症形成的机会[5]。本研究检测结果显示HELQ蛋白的表达随着原发性肝细胞性肝癌患者的肿瘤增大、卫星灶增加和肿瘤Edmonson-steiner分级、血清AFP水平增加而减少，表明HELQ蛋白在原发性肝细胞性肝癌中起着抑癌基因的作用，有研究证实原发性肝细胞性肝癌当其肿瘤直径超过3 cm时肿瘤的分化程度将会降低，肿瘤的恶性程度和侵袭能力将会升高，同时研究结果表明HELQ蛋白表达的缺失与原发性肝细胞性肝癌的增殖能力的指标密切相关。对于其功能引起原发性肝细胞性肝癌发生机制的研究目前还处于起步阶段，仍需要进行更多的实验以证实。英国癌症研究中心伦敦研究所发现缺失HELQ基因一个拷贝的小鼠其形成卵巢癌的可能性提高2倍，甚至缺失仅一个拷贝也足以导致小鼠形成更多的肿瘤,进一步研究是否能做为卵巢癌的治疗靶点[6]。因此HELQ在肿瘤生长中起着十分重要的作用。同时研究表明HELQ蛋白的表达与原发性肝细胞性肝癌的脉管浸润，门静脉癌栓无关，可能与原发性肝细胞性肝癌的转移浸润的机制与HELQ基因的调控途径不同，需要进一步研究。

表1　HELQ蛋白表达水平与原发性肝细胞性肝癌临床病理特征的关系/例

深入地研究HELQ 基因功能将有助于阐明原发性肝细胞性肝癌的发病机制，进一步探索HELQ 基因是否与原发性肝细胞性肝癌的抑癌基因，进而为今后更准确地治疗原发性肝细胞性肝癌提供新的靶点。

[1]Alabert C,Bukowski-Wills JC,Lee SB,et al.Nascent chromatin capture proteomics determines chromatin dynamics during DNA replication and identifies unknown fork components〔J〕.Nat Cell Biol,2014,16(3):281.

[2]许良中,杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准〔J〕.中国癌症杂志，1996，6(4)：229.

[3]Adelman CA,Lolo RL,Birkbak NJ,et al.HELQ promotes RAD51 paralogue-dependent repair to avert germ cell loss and tumorigenesis〔J〕.Nature,2013，502(7471):381.

[4]Muzzini DM,Plevani P,Boulton SJ,et al.Caenorhabditis elegans POLQ-1 and HEL-308 function in two distinct DNA interstrand cross-link repair pathways〔J〕.DNA Repair (Amst),2008,7(6):941.

[5]Huehls AM,Wagner JM,Huntoon CJ,et al.Identification of DNA repair pathways that affect the survival of ovarian cancer cells treated with a poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor in a novel drug combination〔J〕.Molec Pharmacol,2012,82(4):767.

[6]Meindl A,Eirich K,Engert S,et al.Germline RAD51C mutations confer susceptibility to ovarian cancer〔J〕.Nature Genet,2012,44(5):475.

(编辑：吴小红)

Clinical Significance of HELQ Protein in Primary Hepatocellular Carcinoma

LIU Fangping,ZHENG Sufang,LUO Qingfeng,et al.

Wannian Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shangrao,335500

ObjectiveTo investigate the correlation of HELQ protein expression and clinicopathological features and prognosis of primary hepatocellular carcinoma(HCC).MethodsImmunohistochemistry staining was used to detect HELQ protein expression in 71 cases of primary hepatocellular carcinoma.ResultsThe positive expression rate of the MORC2 protein was 30.99% in the 71 primary hepatocellular carcinoma cases,there had significant relation between the positive rate of the HELQ protein and size,satellite focal,Edmonson-steiner grade,AFP of blood,and TNM stage of the primary hepatocellular carcinoma (P<0.05).There had no significant relation between the positive rate of the HELQ protein and age,sex,tumor capsule invasion,invasion of portal vein(PV)and vessel of the primary hepatocellular carcinoma.ConclusionHELQ protein expression decreases in the primary hepatocellular carcinoma,and it is a tumor suppressor gene of the primary hepatocellular carcinoma .

Primary hepatoceIlular carcinoma；HELQ protein；Tumor suppressor gene

江西省卫生厅基金项目(编号：20164068)

335500 江西万年县中医院(刘芳平,郑素芳)；330029 江西省肿瘤医院(罗庆丰,高文,饶华民)

郑素芳

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.08.002

R735.7

A

1001-5930(2016)08-1222-03

2016-03-08

2016-03-21)